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昆虫的激素对昆虫的代谢、发育、生殖、节律、滞育、行为和认知等方面都起到重要的调节作用,对其发育表达及转录调控进行研究具有重要意义。昆虫在不断进化的过程中形成外表皮,并在生长发育过程中不断蜕去旧表皮生成新表皮,最后化蛹,成虫羽化。在这些生理变化过程中都需要激素的调控,其中最主要的激素之一就是前胸腺分泌的促前胸腺激素Prothoracicotropic Hormone (PTTH)保幼激素(juvenile hormone, JH)(JHⅠ,Ⅱ,Ⅲ,0,B3等)是最重要的一类昆虫激素,保幼激素有调控昆虫生长发育、变态和生殖的生理功能。保幼激素的代谢由保幼激素酯酶(juvenile hormone esterase, JHE)、保幼激素环氧水解酶(juvenile hormone epoxide hydrolase, JHEH)和保幼激素二醇激酶(juvenile hormone diol kinase, JHDK)等催化完成。研究昆虫保幼激素酯酶结构、功能和调控机理在开发环境友好型新药剂和基因调控开关等方面具有重要指导作用。本研究以苜蓿夜蛾5龄幼虫虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和|RACE技术,扩增得到该虫PTTH基因及JHE基因的cDNA序列。苜蓿夜蛾促前胸腺激素序列含有823个碱基,包括一个681个碱基的开放阅读框,编码一个含226个氨基酸的蛋白,分子量约为26.3kDa,等电点为8.51,与其他鳞翅目夜蛾科昆虫有较高的同源性,与其他昆虫的同源性一般,但是PTTH分子中的7个半胱氨酸残基的位置是保守且一致的。基因的cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号JF731347。利用Expasy molecular biology server的Scanprosite facility对推导的苜蓿夜蛾促前胸腺激素氨基酸的结构域进行预测。推导得到的苜蓿夜蛾促前胸腺激素氨基酸序列含有一个N-位糖基化位点和一个O-位糖基化位点。将得到的PTTH基因利用表达载体pET21b进行原核表达,经异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别获得与预测蛋白大小相同的蛋白条带。克隆得到的苜蓿夜蛾保幼激素酯酶cDNA序列含有3106个碱基,包括一个1746个碱基的开放阅读框,编码一个含581个氨基酸的多肽,分子量约为63.9kDa,等电点为5.11。获得的苜蓿夜蛾保幼激素酯酶基因cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号JQ901384。使用生物学软件分析苜蓿夜蛾保幼激素酯酶的cDNA序列的分子特性,同时构建原核表达载体,完成苜蓿夜蛾保幼激素酯酶基因在大肠杆菌表达系统中的表达。