AM真菌能与地球上80%的陆生植物建立共生体,能促进植物对大量、微量元素的吸收和利用,能提高植物抗逆性,影响植物对重金属的吸收,改善土壤结构。AM真菌在农业生产和生态方面的前景极其广阔,具有很大的应用价值。由于AM真菌具有专性共生特点,目前无法实现离体纯培养。通过以下研究:烟草无菌苗的获得及扩繁;烟草毛状根的诱导、检测和优化培养,筛选发根农杆菌菌种和烟草品种最佳组合;孢子的消毒、萌发、形态学和分子生物学鉴定,筛选较好的消毒处理;建立双重培养体系,双重培养体系的建立及检测和优化。获得以下结果:1、采用75%酒精消毒1min,次氯酸钠消毒15min对烟草种子进行消毒,其污染率都小于15%,是较好的消毒处理。培养了烟草无菌苗,用9种不同浓度的6-BA、NAA组合对K326诱导愈伤和不定芽,最终筛选出最适培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA。2、采用A4、C58C1对NC82、K326烟草无菌苗叶片侵染,均诱导出了毛状根,其诱导率存在差异。同一发根农杆菌,A4对K326的诱导率(28.89%)高于NC82(22.22%),而C58C1对NC82的诱导率(67.78%)显著高于K326(34.44%);同一烟草品种,C58C1对两个烟草品种的诱导率均高于A4。筛选出快速获得烟草毛状根的发根农杆菌菌种和烟草品种(C58C1和NC82)。对毛状根进行形态学和分子生物学的检测,进一步证明诱导出的四种毛状根均为Ri T-DNA转型根。3、土壤中分离的Gigaspora真菌孢子,经形态鉴定为:Gigaspora gigantea、Gigaspora margarita。用16种消毒处理对孢子进行表面消毒,随着消毒时间的增加,孢子污染率随之降低,其孢子萌发率有先增加后减少的现象;其中,2%氯胺T+2滴0.25%Tween20处理12min,200mg/L链霉素+100mg/L庆大霉素处理10min,孢子萌发率为42.22%,污染率为13.33%,是适合Gigaspora真菌孢子的消毒处理。对萌发的孢子进行基因检测,建立系统发育树,进一步证明萌发的孢子为Gigaspora margarita。4、成功建立了烟草毛状根与Gigaspora真菌孢子双重培养体系,并产生了孢子。同时,在试验中观察到在共培养两周后,菌丝开始寻找到侵入点,发现接种萌发三天的孢子,其菌丝一般能较快速地找到毛状根,并侵入毛状根中。在培养过程中观察到菌丝生长状态以及一些特殊结构(如辅助细胞、扇型菌丝、十字交叉菌丝、D型菌丝、开放的环形菌丝等)。成功地建立了烟草毛状根与巨孢囊霉属AM真菌的双重培养体系。筛选出诱导愈伤和不定芽的最适培养基,获得了大量烟草无菌苗和烟草毛状根;建立了烟草毛状根与Gigaspora真菌双重培养体系,并完成了产孢过程。试验结果为巨孢囊霉属AM真菌菌剂的规模化生产和应用提供了技术参考。