论文部分内容阅读
目的：研究腰椎脊后神经内侧支的临床应用解剖，腰椎小关节骨性关节炎动物模型制备，腰椎小关节退变疼痛的动物模型制备和小关节退变中Hedgehog信号通路初步研究。方法：1、观察12具尸体标本腰椎脊后神经内侧支走行和骨纤维管结构。并测量脊后神经分内、外侧支处至横突根部上缘的距离，内侧支在横突根部至后正中线和体表距离，骨纤维管中点至后正中线和体表的距离。2、60只SD大鼠随机选取一侧腰椎小关节(L5-6)，关节内注入完全弗氏佐剂，为实验组；另一侧腰椎小关节(L5-6)，关节内注入生理盐水，为对照组。术后3天，7天，14天，21天和28天时，测定小关节滑膜中TNF-α和IL-1β炎性因子的含量，并行甲苯胺蓝染色和HE染色，并用OARSI评分系统评估关节软骨退变程度。3、88只SD大鼠随机分为实验组40只，对照组40只，空白组8只。实验组为关节内注入5μL的尿激酶型纤溶酶原激活物(urinary plasminogenactivator,uPA),对照组为关节内注入5μL生理盐水，空白组自然饲养不行手术干预。术前及术后第3、7、14、28、42、56天进行机械缩爪阈值及热刺痛阈值测量，并行脚印面积、站立时相持续时间、举步时相持续时间和举步速度的步态分析。术后第7、14、28、42、56天，随机取实验组和对照组各8只大鼠行小关节软骨甲苯胺蓝染色OARSI评分对关节软骨退变程度进行评价;滑膜HE染色行滑膜炎性评分；IL-1β、TNF-α和iNOS免疫组织化学染色并评分。4、收集手术切除的腰椎小关节标本共24例。依据Weishaupt影像分级标准对MRI影像资料分级。小关节软骨甲苯胺蓝染色、HE染色和免疫组织化学染色，行病理学评分。RT-PCR检测Hedgehog信号通路靶基因GLI1、PTCH1、HHIP的mRNA水平。并进行Weishaupt影像分级、病理评分和基因表达水平之间的相关性分析。结果：1、脊后神经分内、外侧支处至横突根部上缘的距离为3.52～1.87mm；横突根部至后正中线和体表距离分别是2.4～3.3cm和3.1～4.6cm；骨纤维管中点与后正中线和体表距离分别是2.1～2.9cm和2.2～4.0cm。2、大体评分和OARSI评分示实验组高于对照组（P <0.05）。滑膜中TNF-α炎性因子在术后第3天、7天，IL-1β炎性因子在术后第3天、7天和14天，实验组高于对照组（P <0.05）。3、机械缩爪阈值和脚印面积术后第3天、7天、14天，实验组与对照组、空白比较，差异均具有统计学意义（P <0.05）；热缩足反射潜伏期、站立时相持续时间、举步时相持续时间和举步速度术后第3天、7天、14天、28天，实验组与对照组、空白比较，差异均具有统计学意义（P <0.05）。甲苯胺蓝染色软骨退变程度，依据OARSI评分，实验组与对照组组间比较，术后第7天、14天、28天、42天、56天，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。滑膜炎性程度评分术后第7天、14天、28天、42天、56天，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。IL-1β、TNF-α、iNOS表达：实验组与对照组组间比较，术后第7天、14天、28天、42天、56天，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。4、腰椎小关节病理OARSI评分与影像学Weishaupt分级呈正相关（P＜0.01）。腰椎小关节影像学Weishaupt分级和腰椎小关节病理OARSI评分分别与GLI1, PTCH1和HHIP表达均呈正相关（P＜0.01）。结论：1、腰椎小关节的神经主要由脊后神经内侧支支配。2、大鼠腰椎小关节内注射完全弗氏佐剂可诱导腰椎小关节退变，制备可用于腰椎小关节骨性关节炎研究的动物模型。3、大鼠腰椎小关节内注射uPA可制备用于腰椎小关节退变疼痛研究的动物模型。4、证实Hedgehog信号通路参与了腰椎小关节退变的调节。