狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种死亡率达100%的神经性传染病,人和所有温血动物都易感。该病呈世界性分布,主要发生在亚、非、欧和美洲的未发达国家,中国、印度等最为严重。WHO公布的统计数据显示,145个国家中有100个国家报导有狂犬病疫情,全球每年有6万人死于狂犬病,严重威胁着人类健康。造成本病流行的主要原因是人们预防该病的意识不到位,家养动物的免疫密度低,暴露后未能及时进行免疫治疗。本研究以日本构建的狂犬病病毒株rRC-HL cDNA克隆为基础,用反向遗传技术将广西流行狂犬病病毒GX01株的M基因替换到rRC-HL cDNA克隆,构建出含有GX01毒株M基因的RC-HL（GX01M）感染性cDNA克隆,并在BSR细胞成功拯救出突变体重组病毒rRC-HL（GXO1M）。通过测定突变体重组病毒RC-HL（GXO1M）与亲本病毒rRC-HL的生物学特性,发现突变体重组病毒RC-HL（GXO1M）的病毒滴度比亲本病毒rRC-HL低,RNA转录水平、蛋白表达水平以及在细胞间的传播能力也比亲本病毒rRC-HL低。为进一步研究GX01株M基因的功能区域,将GX01病毒的M基因推定的氨基酸序列与RC-HL进行比较,根据氨基酸的差异选定了 4个可能的功能区（M1、M2、M3和M4）,将这4个功能区分别替换到rRC-HL的cDNA中,拯救出4个重组病毒rRC-HL（GXO1M1）、rRC-HL（GX01M2）、rRC-HL（GX01M3）和 rRC-HL（GX01M4）。通过比较 4个重组病毒的生物学特性,发现重组病毒rRC-HL（GX01M2）的病毒滴度、病毒RNA量和病毒蛋白合成量、病毒灶的大小和荧光强度都比另3个病毒（rRC-HL（GXO1M1）、rRC-HL（GX01M3）和 rRC-HL（GX01M4））和亲本病毒rRC-HL显著降低,说明GX01病毒株M基因的M2区与病毒的复制、转录及病毒在细胞间的传播有关。对广西流行狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位进行克隆和测序,与国外固定毒株和类狂犬病毒株进行序列比较分析。结果显示,广西毒株间L基因聚合酶活性部位核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为88.7%-99.7%和96.5%-100%;与国外固定毒株之间分别为84.8%-87.5%和94.5%-99%;与类狂犬病病毒株之间分别为75.5%-79.2%和93.5%-97%。进化树分析结果表明,广西狂犬病流行毒株可分成3个群,Ⅰ群包括GX08、GX091、GX09、GX014、GX195、GX260、GXHX、GXWX、GXLA 和 GXSL,Ⅱ群包括 GX304、GX01、GX074、GX219、GXBM 和 GXPX,Ⅲ群只有GXN119。广西流行狂犬病毒株L基因聚合酶活性部位的特异性位点有第660、745和771位3个氨基酸,其中第745位点为精氨酸,而参考毒株为丝氨酸、亮氨酸或组氨酸。