目的：　　 采用组织工程学技术，通过制备负载人重组碱性成纤维细胞生长因子(rh-BFGF)的人脱细胞羊膜细胞外基质(HAAM)，再将人真皮成纤维细胞培养于HAAM支架上，来探讨构建一种新型人工活性真皮的可行性。　　 方法：　　 1、人幼儿包皮成纤维细胞的原代及传代培养；　　 2、去垢剂-酶消化法制备人脱细胞羊膜细胞外基质(HAAM)，扫描电镜观察及检测其表面结构及孔隙率和孔隙大小，MTT法检测HAAM细胞毒性；　　 3、BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球的制备，扫描电镜观察其表面特性，绘制药物缓释曲线，MTT法检测缓释微球细胞毒性；　　 4、BFGF基体式负载于HAAM，绘制药物缓释曲线，BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球于HAAM上的负载，扫描电镜观察负载情况；　　 5、取第四代人真皮成纤维细胞于HAAM、基体式负载BFGF的HAAM、复合BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球的HAAM上培养，扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况，western blot检测三种支架上生长的成纤维细胞层粘连蛋白表达情况。　　 结果：　　 1、组织块法原代培养小儿包皮成纤维细胞，组织块贴壁5天左右即可观察到有梭形的成纤维细胞从组织块边缘爬出，逐渐围绕组织块以环形放射状向外生长，细胞形态及增殖活性良好。传代后细胞生长速度快，形态好，显示活性良好。　　 2、制备的脱细胞羊膜为白色半透明状的薄膜，复水后柔韧性好。扫描电镜下可见纵横交错的编织状纤维结构，支架的表面及内部有较高的孔隙率，孔隙不规则，孔径大小约为10nm～100nm；MTT法检测HAAM细胞毒性显示材料毒性分级为1级，表明材料无细胞毒性，均为合格。　　 3、扫描电镜观察BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球表面形态显示微球分散较均匀，呈球形，粒径均匀，球体表面光滑；体外缓释曲线显示载药微球在前24小时内突释情况比较明显，累积释放量达到45％。此后进入缓释期，药物缓慢释放，到7天时，药物累积释放量达到90％。　　 4、BFGF基体式负载于HAAM的药物释放曲线显示药物初期释放速度很快，尤其是前24h内，药物累计释放达85％，至第7天释放达95％。扫描电镜观察显示BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球与HAAM表面粘附良好。MTT检测BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球细胞毒性显示材料毒性分级为1级，表明材料无细胞毒性，均为合格。　　 5、人真皮成纤维细胞在三种支架上生长良好，western blot检测培养三天的三种支架上成纤维细胞层粘连蛋白表达情况显示：未负载BFGF的HAAM，基体式负载BFGF的HAAM，明胶-壳聚糖缓释微球负载BFGF的HAAM上培养的人真皮成纤维细胞所表达的层粘连蛋白量依次增加。　　 结论：　　 1、通过组织块法培养幼儿包皮，可以获得形态及增殖活性良好的真皮来源的成纤维细胞，不同代的成纤维细胞具有相似的增殖周期；　　 2、通过酶-去垢剂法所制备的人脱细胞羊膜细胞外基质，完整地去除了细胞成分而不损伤胶原支架结构，且无细胞毒性；　　 3、通过明胶-壳聚糖微球负载BFGF可以制备一个良好的BFGF缓释系统，无细胞毒性，可以起到缓慢、持续地释放BFGF的作用；　　 4、人真皮成纤维细胞种植于负载BFGF-明胶-壳聚糖缓释微球的HAAM上，BFGF的持续缓慢释放及层粘连蛋白的高表达可以促进移植物的血管化，为构建一种新型的人工活性真皮奠定了实验基础。