大菱鲆(Scophthalmus maximus)属名贵海水经济鱼类，原产于欧洲沿海。自1992年引入我国并于1998年开展大规模养殖以来，大菱鲆已成为我国北方沿海地区最重要的工厂化海水养殖鱼类之一，年产值达15亿元以上。但近年来我国养殖大菱鲆疾病流行日益严重，已严重威胁着该养殖产业的健康发展。由于大菱鲆是从国外新引进的养殖品种，我国在其疾病研究方面基本上还是空白。 通过大量的疾病调查，本研究发现了一种可导致我国养殖大菱鲆大量死亡的流行性疾病。依照病鱼的外观症状，将该病暂称之为大菱鲆“红体病”(reddish body syndrome，RBS)。通过对RBS的流行病学、组织和细胞病理学、病原人工感染和细胞接种实验、病毒的纯化和分子生物学分类鉴定等研究，本论文在国内外首次证实大菱鲆红体病是由一种新的鱼类虹彩病毒——“大菱鲆红体病虹彩病毒”(turbot reddish body iridovirus，TRBIV)——引起的病毒性疾病，应称之为“大菱鲆病毒性红体病”(viraI reddish body syndrome of turbot)。 大菱鲆病毒性红体病的流行病学调查显示：苗期、养成期、亲鱼期的大菱鲆均可感染此病，但以养成期最为常见；发病鱼全长一般在10厘米到20厘米，体重介于100克至400克之间。病鱼摄食量低或不摄食、活力弱、呼吸缓慢、散群，分散伏于养殖池四周或在水面附近缓慢游动。病鱼在出现以上症状后很快死亡，属急性死亡，一个月内的累积死亡率达20％以上。该病在养殖期的各个月份均可以发生，高发季节为每年的8月至12月，在5月至7月则相对较少。至2003年，该病的流行范围已遍布整个山东半岛沿海地区，涵盖了我国大菱鲆的主产区。 病毒性红体病大菱鲆的解剖学特征主要有：(1)病鱼体表无明显损伤，但腹面沿脊椎骨附近皮下淤血、发红，侧鳍、尾鳍、胸鳍及鳍基部充血、发红；(2)病鱼贫血，鳃外观呈暗灰色；(3)病鱼血液稀薄、色淡，凝固性差；(4)病鱼胃肠壁呈点状出血;(5)病鱼肾脏失血发暗，呈灰白色。 大菱醉病毒性红体病的组织病理学研究发现，病鱼的脾脏、’肾脏存在有大量的肥大细胞，病鱼鳃丝、脾脏、肠、’肾脏和肝脏组织均存在不同程度的坏死。通过透射电子显微镜观察，在病鱼的多种组织包括鳃、脾脏、肠、肾脏中可以观察到一种大小相同、形态相似的球状病毒粒子，即丁RBIV。这是感染我国养殖大菱坪的下R曰V首次被发现。该病毒的特征包括:(1)成熟病毒粒子具二十面体状的蛋白衣壳(其横切面为六边形或五边形)和球状的病毒核心，病毒含有典型的内脂质膜样(internal，iPid membrane一Iike)结构;(2)成熟病毒粒子的二十面体状衣壳和球状核心的大小分别为，25nm和67 nm左右;(3)病毒在宿主细胞质中装配并以出芽的方式释放;(4)病毒靶组织为鱼体的脾、肾、鳃、肠中的上皮和结缔组织，被病毒感染的细胞多表现为细胞肿大，细胞质匀质化。这些研究明确了大菱坪病毒性红体病的病理学特征，为该病的病理学诊断提供了依据。 为了证实丁RBIV是大菱娜病毒性红体病的病原，本研究进行了大菱虾病毒性红体病的人工感染试验。将过滤除菌的含大量下RBIV的病鱼脾组织匀浆液，通过腹腔注射的方式对健康大菱鲜进行人工感染，结果感染鱼在3周内的累积死亡率达85.7%，死亡大菱鲜表现出腹面和鳍边发红等外观症状。由此证明丁RBIV具有较强的致病力。为了进一步验证下R曰V的致病性和病原性，本研究还开展了牙虾胚胎细胞系(flounder embryonie eell .ine，FEC)培养细胞接种TRBIV的试验。结果表明，过滤除菌的含大量TR曰V的病鱼脾组织匀浆液可以使FEC单层培养细胞产生明显的细胞病变(cytopathic effects，CPE)，在病变「EC培养细胞的细胞质中可以观察到大量的TRBIV。以上实验结果证实TRBIV具有较强的致病性和病原性。通过差速和超速离心，从病毒性红体病大菱虾脾、肾组织内纯化出一种直径约为115~125 nm的球状病毒。该病毒在形态和大小方面都与在病鱼组织超薄切片中发现的TRBIV相似，也与接种TRBIV的FEC培养细胞中观察到的病毒相似。以上这些研究结果证明，丁R曰V是我国养殖大菱虾病毒性红体病的病原。 依据TRBIV的形状、大小、在感染细胞内的位置以及靶组织类型等判断，该病毒不同于已报道的大菱醉虹彩病毒，是一种新的感染我国大菱虾的虹彩病毒。为了深入了解丁RBIV的特性、分类地位，开展了TRBIV的分子生物学鉴定研究。使用依据真绸虹彩病毒(red sea bream iridovirus，RS!均主要衣壳蛋白(major capsid protejn，MCp)基因保守区设计的一对peR引物，成功地从病毒性红体病大菱坪脾组织中扩增出了病毒特异性片断，对该片断进行的克隆和序列测定表明，该片断长度为620 bp，编码病毒MCP的C末端205个氨基酸。该序列己被登录到GenBank数据库中，检索号为八丫590687。将TRB!V MCPC末端的205个氨基酸序列与GenBank中20种虹彩病毒MCP的C末端相应序列进行多序列排列和比对，发现下RBIV和RSIV、鳗鱼传染性脾肾坏死病毒(infectious sPleen and kidney neerosjs vjrus，ISKN均的同源性最高(达98%)，而与蛙虹彩病毒(f rog Virus3，「V3)、淋巴囊肿病毒(LymphoCystiS