本课题以体外培养的SD新生乳鼠心肌细胞为研究对象，采用TGF-β1复制心肌细胞损伤模型，研究 TGF-β1在介导心肌细胞损伤过程中对MAPK信号通路的影响，进一步研究氧化苦参碱（Oxymatrine，OMT)对TGF-β1诱导心肌细胞损伤的保护作用，探讨OMT对心肌细胞损伤的保护机制，为OMT预防和治疗心血管疾病提供一定的实验基础。　　第一部分 TGF-β1诱导心肌细胞损伤与MAPK信号通路的相关性　　目的：探讨TGF-β1诱导的新生SD大鼠原代心肌细胞损伤病理过程中丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPK）家族P38、c-Jun氨基端激酶（JNK)和ERK1/2信号的作用。　　方法：采用胰酶消化法、差速贴壁法及化学抑制剂法分离、纯化1-3 d新生SD大鼠心肌细胞进行原代培养；倒置显微镜观察正常细胞在48 h、72 h的形态学改变；免疫细胞化学法分析心肌细胞特异性肌动蛋白（ɑ-Sarcomeric-actin，α-actin）、肌钙蛋白(Cardiac Troponin T，c-TnT)，鉴定心肌细胞及其纯度。采用MTT法观察不同浓度的TGF-β1对心肌细胞影响，根据相关文献，TGF-β1浓度分别设定为1.25 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL，研究TGF-β1诱导心肌细胞损伤的量毒关系，最终确定TGF-β120 ng/ml、作用时间48 h作为心肌细胞损伤模型复制条件；实验共分为9组：正常对照组(Ctrl)，TGF-β1，TGF-β1 inhibitor(I)组，TGF-β1+P38 I组，TGF-β1+JNK I组，TGF-β1+ERK1/2 I，TGF-β1+TGF-β1 I＋P38 I组，TGF-β1+TGF-β1 I+JNK I组，TGF-β1+TGF-β1 I+ERK1/2 I组；MTT法检测细胞的存活率，LDH外漏分析细胞膜损伤程度，Giemsa染色法从形态学上观察各组心肌细胞形态学的变化，Western blot检测各组p-P38、p-JNK、p-ERK1/2、t-P38、t-JNK及t-ERK1/2蛋白表达水平。　　结果：倒置显微镜下观察原代培养心肌细胞贴壁后呈多边形，48 h后细胞开始出现伪足，并且出现搏动，72 h成簇生长；免疫细胞化学法对心肌细胞特异性蛋白α-actin、c-TNT鉴定，其表达结果呈阳性，即胞浆中有棕黄色颗粒出现，且纯度达到92％；TGF-β1(20 ng/mL，48 h)作用心肌细胞后，OD490值降低（P<0.01)，而LDH外漏量升高(P<0.05)；各阻断剂组处理之后MTT法测得的OD490值升高（P<0.05或者P<0.01)，LDH外漏量降低（P<0.05或者P<0.01)，且 TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1 I+P38 I、TGF-β1+P38 I组之间，TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1I+JNK I、TGF-β1+JNK I组之间，TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1I+ERK I、TGF-β1+P38 I组之间OD490值与乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）外漏量进行比较，均未见显著性差异；Giemsa染色法证实TGF-β1可诱导心肌细胞产生损伤，而各阻断剂组可以降低TGF-β1诱导的心肌细胞损伤；Western blot实验结果证实，TGF-β1可使心肌细胞p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达上调（P<0.01)，而各阻断剂组抑制p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白的表达（P<0.01)，且TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1 I+P38 I、TGF-β1+P38 I组之间，TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1I+JNK I、TGF-β1+JNK I组之间，TGF-β1+TGF-β1 I、TGF-β1+TGF-β1 I+ERK I、TGF-β1+P38 I组之间比较，差异不具有统计学意义；而各个组总蛋白的表达均无差异。　　结论：TGF-β1诱导心肌细胞损伤，其作用机制与 p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达上调有关,并且MAPK是TGF-β1的下游信号。　　第二部分 OMT调控MAPK信号保护TGF-β1诱导心肌细胞损伤　　目的：建立TGF-β1诱导新生SD大鼠原代心肌细胞损伤模型，探讨OMT对TGF-β1诱导心肌细胞损伤的保护作用及对MAPK家族成员P38、JNK、ERK1/2的影响，阐明OMT对心肌细胞损伤保护作用的机理，为心肌细胞损伤的相关疾病寻找新的切入点。　　方法：原代心肌细胞培养同第一部分。采用TGF-β1最佳浓度20 ng/ml、作用时间48 h进行模型复制。实验共分为6组：Ctrl.，模型组(TGF-β1，20 ng/mL)，OMT高剂量组(OMT-H，0.1 mg/mL)、低剂量组(OMT-L，0.05 mg/mL)，阿司匹林组(Aspirin，Asp，10-5 mol/L)，丹酚酸B组(Salvianolic acid B，Sal B，50?mol/L)。MTT法检测细胞的存活率，LDH外漏分析细胞膜损伤程度，Giemsa染色法从形态学上观察各组心肌细胞形态学的变化，Western blot检测各组p-P38、p-JNK、p-ERK1/2、t-P38、t-JNK及t-ERK1/2蛋白表达水平。　　结果：通过MTT实验，LDH试剂盒检测以及Giemsa染色结果表明，OMT可有效的减少TGF-β1诱导的心肌细胞损伤。Western blot实验结果提示OMT干预可降低TGF-β1诱导的心肌细胞中p-P38，p-ERK1/2，p-JNK的表达，而对总蛋白的表达均没有影响。　　结论：OMT对TGF-β1诱导的心肌细胞损伤具有明显的改善作用，其作用机制与抑制p-P38、p-JNK、p-ERK1/2表达密切相关。