转基因食品安全性评价方法研究

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第一部分:原代BN大鼠致敏动物模型验证目的:验证BN大鼠做为评价转基因食物蛋白致敏性动物模型的可行性。方法:48只雌性BN大鼠随机分为对照组(灭菌水)、马铃薯酸性磷酸酶组(PAP)、鸡蛋清粗提蛋白质组(HEWP)、卵清蛋白低剂量组(OVA-L)、卵清蛋白中剂量组(OVA-M)、卵清蛋白高剂量组(OVA-H),每组8只,各组依次分别每天经口灌胃1ml灭菌水、1mg/ml PAP,10mg/ml HEWP.0.1mg/ml OVA、1mg/ml OVA、10mg/ml OVA溶液,持续6W。分别于第14d、28d和42d取血分离血清,测定特异性抗体IgG。于第21d和35d取血分离血浆,测定组胺。测定各组动物的血压变化、胃肠道渗透性及病理变化。结果:不同浓度致敏原OVA均可激发BN大鼠过敏反应,包括特异性IgG、组胺升高量。弱致敏原HEWP过敏反应较弱;非致敏原PAP无过敏反应;各组不同时间血压无明显变化;各组胃肠功能均未发生明显的生理变化;致敏原均未引起心、肝、脾、肺、肾脏器炎性变病。结论BN大鼠致敏动物模型是评价转基因食物致敏性较为理想的动物模型。第二部分:BN大鼠三代致敏模型的研究目的:了解三代大鼠亲代在不同的暴露环境下(OVA溶液或灭菌水),大鼠对致敏原的免疫反应,进一步完善BN大鼠致敏评价动物模型。方法:各代均有两个致敏模型,F1代(Model1、Model2)、F2代(Model3、Model4)、F3代(Model4、Model5),各模型亲代暴露环境均不同;每个模型的大鼠按体重和性别随机分成OVA组和对照组,每组雌雄各8只,各组每天经口分别灌胃1mg/mlOVA溶液和灭菌水1ml,持续42d,分别于第14d、28d和42d取血分离血清,测定特异性抗体1gG、1gE和血清总IgE。于第21d和35d取血分离血浆,测定组胺。灌胃结束后,测定各组动物血象生化、病理变化指标。结果:亲代暴露在不同背景下,各模型对致敏原的反应水平也不同,亲代非暴露致敏原的大鼠致敏后血清中IgG水平高于亲第一代、第两代、第三代均暴露于致敏原的大鼠;亲第一代暴露于致敏原后,第二代、第三代非暴露,大鼠致敏后IgG水平较高。各个模型致敏后血清总IgE、特异性IgE、组胺水平无明显差异。结论:亲代连续暴露致敏原,子代大鼠易产生耐受性,亲代非暴露致敏原,子代对致敏原非耐受,BN在无暴露的情况下繁殖一代,可做为较好的致敏动物模型,用于转基因食品过敏性评价。
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