四种植物多糖抗鸭圆环病毒病的效果评价

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鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)是一种能引起多种鸭群的传染性免疫抑制病毒,在世界范围内养殖业广泛传播,因其感染后免疫抑制导致的继发感染,以及至今没有防治药物及疫苗的现状,给养殖业带来的损失日益增多。因此,开发疗效更好、毒性小的抗病毒药物治疗鸭圆环病毒病(Duck circovirus disease,DuCVD)已迫在眉睫。越来越多的证据表明,从天然资源(植物、动物和真菌)中提取的多糖可能在预防或治疗病毒病方面提供有前途的策略。多糖的抗病毒生物活性是通过直接杀伤病毒、增强免疫功能来实现的。本研究从黄芪、松花粉、芦荟、无花果叶中分别提取出黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)、松花粉多糖(Pine pollen polysaccharides,PPPS)、芦荟多糖(Aloe Vera polysaccharides,AVE)、无花果叶多糖(Ficus carica L.leaves polysaccharides,FCPS)作为研究对象,运用分子生物学等技术在体内探究多糖对DuCV的影响,在体外以鸭外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes,PBMC)作为靶细胞,揭示多糖抗PBMC凋亡作用。本研究旨在为研制对DuCVD具有治疗作用的新型药物提供实验基础和理论依据。主要研究内容和结果如下:1、DuCV感染早期病毒复制规律的探究本试验选取80只1日龄樱桃谷肉鸭随机分为2组,DuCV组和Mock组。DuCV组每只1日龄雏鸭接种0.2 mL 10~2ID50/mL的病毒悬液,Mock组不做处理。每日随机选取5只雏鸭进行剖杀,采集部分器官及血液样本,持续8天。通过q PCR法检测相关体内病毒载量、CCK-8法检测淋巴细胞转换率以及流式细胞术检测体内PBMC凋亡情况,通过ELISA方法检测相关免疫指标变化情况,主要包括血清中IL-1β、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-α、IFN-γ、sCD4、sCD8的含量。结果表明,所检测器官在感染后的第2天均可以检测到病毒,并且肝脏和脾脏病毒含量较其他器官病毒含量高;感染后前5日雏鸭机体内存在强大的先天免疫,因此前5日病毒在体内复制缓慢,感染后第6天至第8天病毒复制迅速。另外,我们发现DuCV在体内的复制会降低淋巴细胞转化率,可诱导PBMC发生凋亡,且随着感染时间的延长,细胞凋亡现象更加明显。2、四种植物多糖抗DuCV感染的效果评价将150只1日龄樱桃谷肉鸭随机分为5组,每只雏鸭接种0.2 mL 10~2ID50/mL的病毒悬液并分别口服PBS和APS、PPPS、AVE、FCPS各8 mg/d,持续48天。在8、16、24、32、40、48 dpi从鸭身上摘取免疫器官和采集血清样本,运用临床症状分析、分子生物学实验、血清学实验分别检测免疫器官指数、器官病毒载量、血清中细胞因子含量。结果表明植物多糖可以促进血清中IL-1β、IL-8、IL-12、IFN-α、IFN-γ、sCD4、sCD8的分泌,降低IL-10的含量进而提高鸭的免疫功能,降低病毒载量,减轻DuCV对免疫器官的损伤,提高淋巴细胞转换率,其中APS、PPPS效果显著。并且我们发现APS、PPPS从病毒感染早期开始发挥作用,AVE、FCPS在病毒感染后期发挥作用。通过体外四种多糖抗PBMC凋亡的检测来看,APS、PPPS同样显著减弱了DuCV感染引起的PBMC细胞凋亡。综上所述,我们的结果表明,APS、PPPS在体内和体外都有显著的抗DuCV效果,可以成为抗DuCV感染的药物候选。
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