目的:人类会被病原微生物侵袭,导致多种多样的感染和传染性疾病,细菌和病毒是繁多种类病原微生物中最具有危害性的。因此病毒感染在人类疾病中十分常见,例如第三世界国家成年人大都遭受过单纯疱疹病毒的感染;病毒性上呼吸道感染也比较常见,基本上每个人都有天然存在人体的免疫效应,该反应不单针对某种异体物质,而是针对侵袭机体的的一切异体物质,即称之为天然免疫反应或者固有免疫反应。尤其在病毒感染早期,特别是在未形成特异性免疫反应时,固有免疫反应对防止病毒入侵和清除病毒、终止感染起着主要的作用。本研究组前期研究发现MAP2蛋白与RLH抗病毒固有免疫信号通路中核心蛋白MAVS存在相互作用,并且其参与调控抗病毒免疫反应。因此我们应用细胞转染及免疫荧光共聚焦等实验技术初步探究MAP2产生调节抗病毒免疫反应可能存在的作用机制。方法:1、选用Hela细胞系作为实验研究的载体;2、应用以DNA重组技术为核心的生物技术构建本实验所需要使用的质粒;在NCBI上查找并确认实验中所需要使用的目的基因片段的碱基序列,设计引物并送公司合成;应用聚合酶链式反应即PCR生物技术放大扩增设计的特定DNA片段;DNA电泳技术检验目的片段,并使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收产物,将目的片段根据设计的内切酶行双酶切,再利用PCR产物回收试剂盒回收目的产物,将回收的产物DNA电泳验证后进行载体连接、转化;挑选单克隆后送公司测序,测序正确后进行质粒中提备用。3、应用细胞转染技术在Hela细胞系中过表达本研究的目的基因,并应用转染技术或者病毒刺激细胞激活RLH介导的抗病毒固有免疫信号通路;4、应用细胞免疫荧光染色技术及免疫荧光共聚焦技术观察MAP2在不同情况下对细胞线粒体及线粒体抗病毒信号蛋白MAVS的影响;5、应用NO供体及NO前体处理细胞后观察其对细胞线粒体的影响。结果:1、应用免疫荧光共聚焦技术验证MAVS定位于线粒体;2、共同过表达MAP2和MAVS,MAVS在细胞中的分布状态发生了改变,即MAVS在细胞中聚集;3、当细胞仅仅过表达MAP2时,线粒体的分布未有改变,因此MAP2并不能直接影响线粒体分布;4、共同过表达MAP2和MAVS的细胞中,线粒体发生了聚集现象;5、使用多种方法激活RLH介导的抗病毒固有免疫信号通路时,过表达MAP2也能改变线粒体在细胞中的分布,即同样产生了聚集现象;6、过表达与MAP2功能相似的另一种亚型MAP1和MAVS,并未改变MAVS在细胞中的分布。7、应用NO供体及NO前体处理细胞后,细胞中线粒体也发生了聚集现象。结论:1、MAP2在RLH信号通路激活状态下与MAVS相互作用而影响了线粒体及MAVS分布,推测MAP2可能通过调节MAVS及线粒体抗病毒免疫反应而产生调节作用;2、NO供体及NO前体处理细胞细胞后,线粒体同样出现了聚集现象,因此MAP2也可能通过调节细胞NO产生影响MAVS及线粒体分布,从而调节抗病毒免疫反应。