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白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）是一种重要的炎症和免疫调节因子。近年来,包括乳杆菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属在内的一些特定肠道微生物菌株或混合菌剂被报道能够在体内及体外模型中上调IL-10,进而显著缓解炎症状态。IL-10诱导能力的评价模型主要包括人外周血单个核细胞模型、巨噬细胞模型和炎症疾病模型等,但是这些模型存在着对肠道免疫的还原程度不高（细胞模型）通量小（动物模型）等问题。高通量体外模型的缺乏制约了IL-10高诱导能力菌株的筛选以及针对益生菌特定种群诱导IL-10规律的探究。2018年,在Science Immunology上报道了一种可用于高通量筛选的肠系膜淋巴结（Mesenteric lymph node,MLN）共培养模型,并且研究人员从中筛选出了抑炎效果良好的两歧双歧杆菌PRI1。基于此,本研究参考该团队报道的体外共培养模型高通量筛选具有诱导IL-10能力的乳酸菌。对具有诱导能力的菌株活性成分及机制进行初步探究,并进一步在无菌鼠、免疫稳态小鼠以及TNBS诱导结肠炎小鼠中进行验证,筛选能够诱导IL-10并抑制炎症的有效菌株,为其应用提供理论依据。本研究通过体外模型筛选出了具有诱导MLN产生IL-10能力的益生菌菌株,并对其效应成分以及诱导机制进行了初步探究。首先,根据文献报道在本实验室建立了MLN体外共培养模型。以菌体和MLN细胞悬液共培养后上清中IL-10的水平为主要监测指标,比较了添加免疫刺激剂（anti-CD3、anti-CD28）对IL-10产生的影响。结果表明:在不添加任何刺激剂或仅添加anti-CD3时,乳杆菌和双歧杆菌均不能诱导MLN产生IL-10;当同时添加刺激剂anti-CD3和anti-CD28时,乳杆菌依然无法诱导MLN产生IL-10,而特定双歧杆菌能够诱导IL-10的产生,最高可达524 pg/m L。由此可知,在体外MLN共培模型中,双歧杆菌和乳杆菌均无法直接诱导IL-10的产生。在免疫激活状态下,特定双歧杆菌诱导了IL-10的分泌。进一步利用该体外评价模型对双歧杆菌属共计210株菌诱导IL-10能力进行评价,结果表明,受试菌株中两歧双歧杆菌的诱导能力呈现规律性分布,可分为高、中、低（或不能诱导）三种水平。由于两歧双歧杆菌在抑制炎症方面具有潜力及其食品中添加的可能性,进一步对本实验室分离和保藏的87株两歧双歧杆菌进行评价,最终筛选得到在体外模型中具有高诱导能力的菌株——两歧双歧杆菌B96,诱导能力可以达到空白组水平5倍以上。进一步研究表明:B96体外诱导IL-10具有剂量依赖性,并且活性物质具有热敏性。经蛋白酶处理后,菌悬液的超声上清不再能够诱导IL-10产生,提示B96诱导IL-10与蛋白相关。但是,提取菌体外膜蛋白及总蛋白进行培养无法诱导相当量的IL-10,表明仅蛋白成分无法诱导IL-10。据此推测,两歧双歧杆菌B96表面脂蛋白或糖蛋白可能参与了该菌株诱导MLN产生IL-10。转录组测序（RNA-seq）结果表明两歧双歧杆菌B96增强了anti-CD3和anti-CD28诱导的获得性免疫应答并激活抗原提呈、共刺激分子的表达等,促进Th1/Th2间的平衡向Th2方向倾斜,Th17/调节性T细胞（T regulatory cells,Tregs）间的平衡向Tregs方向分化。对常见固有免疫模式识别受体在IL-10产生中的必要性分析发现:两歧双歧杆菌B96诱导MLN产生IL-10依赖Toll样受体（Toll-like Receptors,TLR）2,不依赖TLR4。为进一步探究两歧双歧杆菌B96在体内的诱导能力以及抑炎作用,将菌株分别灌胃无菌鼠、免疫稳态小鼠以及TNBS诱导结肠炎小鼠后检测IL-10、Tregs及结肠炎小鼠存活率、结肠损伤情况等。研究结果表明:B96灌胃可以上调无菌小鼠结肠固有层Tregs水平,但是对MLN和脾脏中Tregs的水平没有影响、结肠IL-10的水平没有显著差异。SPF级小鼠稳态模型中,B96灌胃对MLN、脾脏中Tregs的数目及结肠IL-10的水平无影响。但B96灌胃能显著缓解TNBS诱导的结肠炎,在造模5天后检测时,B96组存活率100%,结肠无明显损伤,结肠组织IL-10水平恢复至正常水平。肠道菌群扩增子测序结果表明两歧双歧杆菌B96缓解TNBS诱导结肠炎的作用不依赖于肠道微生物组成的变化,但是B96灌胃显著增加了肠道中双歧杆菌的丰度。