日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节

来源 :中南大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:angelcaoxian
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究着重于对日本血吸虫(Sj)雄虫源性抗原候选疫苗分子的筛选鉴定和保护性免疫的研究,以及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节研究二大部分。 为获得Sj雄虫特异性抗原疫苗候选分子,开展了Sj雄虫天然组分抗原的分离鉴定及保护性免疫研究。采用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)比较分析Sj雄性、Sj雌性的抗原组分,Western blot检测组分蛋白的抗原性和性别特异性,动物实验评估抗原的免疫保护效果。结果发现Sj雄虫可溶性抗原含一高丰度带,为44.6kDa,Sj雌虫可溶性抗原中未见类似带。通过SDS-PAG胶切法,获高纯度44.6kDa蛋白。Western blot检测44.6kDa蛋白具抗原性和雄虫特异性,并诱导小鼠产生39.31%的减虫率和41.98%的减卵率,与对照组比差异有显著性(p<0.001)。有关其抗雄虫特异性免疫值得今后研究。 为寻找雄虫抗原表位模拟肽分子,从表位分子水平构建Sj新型疫苗,作者进行了Sj雄虫抗原表位模拟肽的筛选及其保护性免疫研究。用抗Sj雄虫抗原的IgG筛选噬菌体随机肽库,获得多个阳性噬菌体克隆,Dot-ELISA鉴定其具有抗原性。用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠获31.72%的减虫率和51.54%的减卵率,与对照组比差异有显著性(p<0.001),表现为抗Sj感染和抗生殖作用。 为发现雄虫特异性的基因及其编码的靶抗原分子,从基因水平揭示V性别特异性差异,采用U雄虫免疫血清筛选对成虫CDNA文库,对部分阳性克隆的插入片段进行 PCR鉴定及测序。结果获得 11个阳性克隆,通过互联网进行核着酸序列同源性分析,发现三个新基因,百 分M、Cps和#ps(GenBan 注册号分别为AF519808、AF524896和 AF517843入 它们的预测编码蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的信息传递分子,三个新基因是否为雄虫性别特异性值得进一步探讨。对SfMA进行了亚克隆及原核表达,并用表达产物免疫小鼠。结果获得SJ-MA原核表达的重组体,并在ECOli中高效表达。SDS-PAGE和Western blot显示融合蛋白为54.skDa具良好的抗原性。融合蛋白与FCA混合免疫小鼠可诱导高滴度的特异性格G抗体,免疫组的减虫率及减卵率分别为34.29%与48.76凡 与对照组比差异有显著性 (/0.001人表明新基因 SfMA表达蛋白能诱导小鼠抗 SJ的保护性免疫,提示其作为U疫苗候选分子的潜在价值。 为研究细胞因子DNA对核酸疫苗免疫的调节,作者分别构建了小鼠 IFN个和小鼠几对真核表达重组质粒,并首次分别联合 SJ组织蛋白酶B DNA疫苗免疫小鼠,通过免疫酶组织化学技术观察两种质粒DNA在小鼠肌肉细胞的表达,通过减虫率减卵率评估免疫保护性作用。结果两种细胞因子质粒和 DNA疫苗在小鼠肌肉细胞分别同时表达,其中 IFN一下白显著增强 DM疫苗的减虫率(27.37%,P<0,05),而几一4能显著增强*A疫苗的减虫率不减卵率(43.200和 76.63O,/0,01)。为研究 Th型和 ThZ型应答优势分别对 DNA疫苗免疫的调节奠定基石出。
其他文献
目的:以基因重组的方法构建人白细胞介素15(hIL-15)基因重组体,并在肝癌细胞BEL-7402中表达,为进一步研究IL-15的功能及临床应用奠定基础。同时将构建好的IL-15真核表达质粒与HBsAg核酸疫苗共同免疫Babl/c小鼠,以观察其对小鼠免疫应答的影响。 方法:依据Genbank中人白细胞介素15cDNA的序列,结合表达载体的特点,设计、合成一对IL-15基因序列特异性引物,从正
目的:本研究通过建立鸡的形觉剥夺性近视眼(Form-deprivation myopia,FDM)动物模型,研究视网膜和脉络膜中转化生长因子β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白质及其mRNA在FDM形成中的变化,探讨TGF-β1和iNOS在近视发病
内皮细胞的种植可明显提高人工血管的远期畅通率和人工血管、人工心脏瓣膜的抗血栓形成能力,在临床上应用日益增加。血管内支架作为心血管植入材料的一种,在降低经皮穿刺血管球囊成形术再狭窄发生率的同时,也存在着血栓形成和支架内再狭窄的问题。血栓形成主要是因为内皮损伤和支架的异物源性,支架内再狭窄形成主要是因为内膜增生。如果在血管内支架表面种植内皮细胞,理论上有可能防止或降低血栓形成和支架内再狭窄发生,因此加
以一维、准一维DNA分子链及准一维多链无序体系为研究对象,从单电子紧束缚模型的哈密顿量出发,利用在负本征值理论及无限阶微扰理论发展起来的多对角高阶随机厄米矩阵的求解方法及传输矩阵方法、重整化群方法等,研究了一维随机二元无序DNA分子链、一维准周期Cantor型和RS型人工DNA序列、SRY基因序列、准一维多链无序体系、准一维鱼骨模型DNA分子链及准一维Ladder模型的DNA分子链的电子结构及电子
血吸虫病是严重危害人类、牲畜健康的寄生虫病。虽然采取大规模人畜同步化疗及易感地带灭螺等措施后,血防工作取得了重大成绩,但由于再感染及反复化疗费用等问题,免疫预防血吸虫病已成为当今研究工作的重点。DNA疫苗(或称核酸疫苗)是90年代新发展起来的疫苗,具有易于制备和纯化,化学和生物学性质稳定,不需冷藏,便于保存和运输,来源不受限制,作用时间长,目的抗原在细胞内表达,类似于天然抗原,可诱发细胞毒淋巴细胞
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cell)系是从早期胚胎细胞分离培养而建立的高度未分化的具有全能性的细胞系。在体外,ES细胞可自发分化为含有内胚层、中胚层、外胚层来源的多种组织和细胞的拟胚体。如何促进ES细胞向造血细胞定向分化是血液界学者关注的热点。目前,诱导ES细胞向造血细胞分化主要应用小鼠成纤维细胞系(如OP9、MS-5、RPO.10、ST2、NIH-3T3、PA6等
目的:探讨日本血吸虫重组蛋白、核酸疫苗、重组链球菌活菌苗粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力及寻找新的疫苗侯选分子的基因。 方法: 1、核酸疫苗及重组链球菌活菌苗按常规方法构建。 2、保护试验用动物为BALB/C和昆明系小鼠。分别用rSjFer和rSjGST-CA(佐剂为CTB),SjTs-1/pc、Sj31/VR1012、SjCA/pc和SjMf1/pc(佐剂为MPL),SjCA
滴滴推出老年人一键叫车小程序;百度上线"百度大字版App";首汽约车则在北京率先试用首个专为老年人出行设计的网约车"助老模式"产品。近年来,似乎所有的互联网平台都在争夺年轻人,仿佛得到年轻用户的青睐就掌握了互联网的未来。但对于关注老年市场的人来说,或许并非如此。事实上,在众多平台都在争夺年轻人的同时,
期刊
幼儿是祖国的未来,关注幼儿阶段的身心发展是当代教育所必须关注的重点。由于幼儿年龄较小,所以在进行教学过程中更加倾向于游戏教学,教师通过设计一些适合幼儿的小游戏,以此来促进幼儿智力水平的提升,同时也能很好地锻炼幼儿的反应能力,提升其身体素质,而且游戏也是幼儿最喜欢的活动,幼儿的参与积极性自然也会增加。我国传统的民间游戏种类比较多,
期刊
骨关节炎(osteoarthritis,OA)是临床上最为常见的老年性运动系统疾病之一。研究表明,衰老是OA发生发展的重要影响因素之一,但其具体作用及机制尚未完全清楚。本研究通过CRISPR/Cas9技术,建立了Cdkn2a-e(Luc-2A-tdTomato-2A-CreERT2-WPRE-pA)1定点敲入的杂合子小鼠模型,可在小鼠活体内追踪衰老经典标记物Cdkn2a(p16, p16INK4a