本课题以牛β-酪蛋白(β-casein，β-CN)、牛κ-酪蛋白(κ-casein，κ-CN)和大肠杆菌O157:H7菌体为抗原，经鸡体和兔免疫，获得源于鸡卵黄和兔血清的两类抗体，并对它们的化学稳定性和与抗原的结合特性进行了对比研究，并将特性较优的抗体做了胶体金标记，标记效果良好。　　 1、两类特异性抗体的制备：以两种乳源蛋白和一种微生物菌体为抗原，分别免疫产蛋鸡和新西兰大白兔，获得高免鸡蛋和抗血清，采用水稀释冻融法、膜分离、盐析和亲和层析等纯化步骤，可以制备得到纯度为90％以上的卵黄抗体(Immunoglobulin ofyork，IgY)，采用三级盐析和亲和层析结合的方法，可从血清中获得纯度在95％以上的血清抗体(主要成分为Immunoglobulin G,IgG)。　　 2、两类抗体的特性比较：以抗κ-CN抗体为代表，对比研究了IgY与IgG两类抗体对热和酸碱的稳定性，结果表明IgG抗体的热稳定性较IgY强（经30min热处理后IgG活性下降50％温度为70℃，IgY为63℃），同时，酸碱稳定性IgG也更强（IgG的稳定pH范围为2～11，IgY为3～10）。采用硫氰酸铵洗脱法和尿素洗脱法测定了三对抗体与其相应抗原的结合情况，用尿素洗脱法测得的抗β-CN、κ-CN和O157:H7IgY的相对亲和力指数分别为79.1％、80.2％、90.4％，高于IgG的55.7％、58.3％、56.4％，这同硫氰酸铵洗脱所得的浓度抗体保留率曲线共同说明了三种特异性IgY抗体与对应抗原的亲和力比IgG强。本实验还研究了这三组抗体与相近抗原的交叉反应情况，结果显示两组抗乳源蛋白的抗体与相近抗原存在非常明显的交叉反应，而抗大肠杆菌O157:H7抗体特异性较好，仅与普通大肠杆菌存在较弱的交叉反应。利用相近抗原κ-CN和乳清粉两种相近抗原对抗β-CN抗体进行修饰后，交叉反应明显下降；用3-CN和乳清粉以同样的方式处理后的抗κ-CN抗体也有同样的效果。比较而言，IgY与相近抗原的交叉反应要小于IgG。　　 3、抗体的胶体金标记及其效果评价：利用光谱扫描的方法，筛选得到最佳的胶体金制备方法为抗坏血酸还原法，并得到其最佳制备条件为：100ml0.01％四氯金酸溶液中1％抗坏血酸添加量为1ml，反应时间为5min。选用三种IgY抗体进行胶体金标记，先确定抗β-CN、κ-CN、O157:H7 IgY抗体蛋白的最佳标记量为39μl/ml、26μl/ml、26μl/ml（抗体样液体积/胶体金体积），pH为5.5。在最佳标记条件下对这三种抗体进行胶体金标记，标记率分别为62.0％、60.3％、60.4％，三种金标抗体的效价分别为1:640、1：1280、1:640，能保持与相同蛋白浓度未标记抗体（原）一致的效价。　　 本研究通过IgY与IgG的特性比较，为抗体的选择和应用提供了重要的参考信息；通过抗体的胶体金标记，为建立快速的免疫层析检测方法奠定了坚实的基础，为以乳源蛋白含量为目标的乳品掺假检测研究提供了一个新的探索方向。