OVA66是本实验室应用重组cDNA表达文库血清学分析（SEREX）技术筛选人卵巢癌cDNA文库得到的一种新的肿瘤相关抗原。前期实验结果表明OVA66在正常组织中主要表达于睾丸，而在大部分肿瘤组织中（胃癌、肝癌、卵巢癌等）高表达，呈CT抗原的表达特点，且OVA66的高表达可促进肿瘤细胞的增殖，有利于肿瘤细胞的侵袭和转移。OVA66是一个广泛的具有免疫原性的肿瘤相关抗原，不仅能诱导特异性T细胞克隆的产生，还能激发人体产生体液免疫应答，提示其在临床肿瘤诊断和治疗方面具有良好的前景。本文对肿瘤相关抗原OVA66的连续性B细胞表位定位进行了研究。主要内容包括两个方面： ㈠OVA66及其三个片段融合蛋白的表达纯化及抗原表位初步定位原核表达并纯化pET28b-OVA66融合蛋白，同时将OVA66基因分成三个片段，构建重组质粒pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66 片段3 并分别原核表达，纯化得pET28a-OVA66 三个片段融合蛋白。收集癌症患者和正常人血清，建立ELISA法，结合Westernblot结果，获得17例OVA66抗体阳性的癌症患者血清，Western blot发现其中一例患者血清所针对的抗原表位位于OVA66片段3，而本实验室自制的两株小鼠抗OVA66单克隆抗体5F4和4G9则分别作用于片段1和片段2。 ㈡OVA66蛋白连续性B细胞抗原表位的预测及筛选应用生物信息学方法，综合单参数（亲水性、可及性、柔韧性、极性）预测、二级结构预测、BcePred 及EpiShotTM软件的预测结果，提示OVA66的连续性B细胞表位可能位于392-411，270-289，519-538，461-480，10-29，43-55，212-227，284-301和487-501氨基酸残基的区域内，合成这些候选表位肽段并应用EILSA 法，分别以小鼠抗OVA66单抗及多抗、兔抗OVA66多抗及17例OVA66抗体阳性的癌症患者血清作为一抗筛选肽段，以大于空白孔OD值2 倍作为阳性，发现小鼠多抗作用于肽段P2（OVA66片段2内）和P5（OVA66片段1内），兔多抗作用于肽段P8（OVA66片段2内），而1例癌症患者作用于肽段P9（OVA66片段3内）。 本研究成功构建了重组载体pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66片段3，表达并纯化了OVA66及其三个片段融合蛋白。获得了2条（P2、P5）小鼠抗OVA66多抗针对的表位肽段，1条（P8）兔多抗针对的表位肽段及1条（P9）癌症患者针对的表位肽段，为进一步探讨OVA66的临床应用价值奠定基础。