免疫组化定位角蛋白、α-SMA、Na+-K+-ATPaseα/β、NKCC1和AQP5在外泌汗腺的表达

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lyt0821
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目的:  人体外泌汗腺由分泌部和导管部组成,它们在形态和功能上有所区别,为了更好地了解这两部分结构,我们使用双重荧光免疫组织化学染色的方式,检测与汗腺结构和功能相关的角蛋白和α平滑肌肌动蛋白(?-SMA)的具体定位来区分两者,同时,为了进一步研究人体汗腺再生修复的机制,我们首先需要定位在汗腺各种生理活动中的重要功能蛋白。由于Na+-K+-ATPaseα/β(钠钾ATP酶α/β亚单位),Na+-K+-2Cl-cotransporter1(钠钾氯协运体-1)和Aquaporin-5(水通道蛋白-5)在汗腺正常生理功能中发挥着重要作用,本研究针对这4个蛋白也进行了定位研究。  方法:将获得的人正常皮肤标本进行一系列处理,制成石蜡包埋标本,进行切片,切片厚度为3μm,首先行HE染色,并进行以下处理:  1、使用双重荧光免疫组织化学染色的方式,用配对方式检测以下蛋白:CK8/CK5;CK8/CK14;CK7/CK5;CK7/CK14;α-SMA/CK5;α-SMA/CK14;  2、采用过氧化物酶免疫组织化学染色(DAB)方法,检测以下蛋白:Na+-K+-ATPaseα/β(钠钾ATP酶α/β亚单位),Na+-K+-2Cl-cotransporter1(钠钾氯协运体-1)和aquaporin-5(水通道蛋白-5)。分别在荧光显微镜和光学显微镜下观察并拍摄记录结果。  结果:  (1)双重荧光免疫组织化学染色结果显示,人体外泌汗腺分泌部CK5+/CK7+,CK5+/α-SMA+,CK14+/CK7+,CK14+/α-SMA+;  (2)人体外泌汗腺导管部:CK5+/CK7-,CK5+/α-SMA—,CK14+/CK7-,CK14+/α-SMA-;  (3)Na+-K+-ATPaseα主要表达部位有:上皮基底层和基底层以上的细胞膜、汗腺分泌部的基底外侧膜、汗腺导管部的外层细胞和基底外侧膜;  (4)Na+–K+-ATPaseβ的表达部位,除了不在直导管和上皮表达之外,其他表达部位跟Na+–K+-ATPaseα一致;  (5)NKCC1只在汗腺分泌部的基底外侧膜表达;  (6)AQP5在汗腺分泌部上皮细胞顶端膜部位强表达,胞浆弱表达。  结论:  (1)利用CK5/CK7/CK8/CK14和α-SMA等抗原双重免疫荧光组织化学染色的方法可以清楚辨别人体外泌汗腺的分泌部和导管部不同结构,有助于进一步的研究;  (2)Na+-K+-ATPaseα/β(钠钾ATP酶α/β亚单位),Na+-K+-2Cl-cotransporter1(钠钾氯协运体-1)和aquaporin-5(水通道蛋白-5)在人体外泌汗腺不同部位有着不同的分布表达,跟其功能具有密切关联。
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