【摘 要】
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平菇（P0）是一种常见的食用菌,在我国种植广泛。随着对平菇研究的不断深入,人们将黄芪作为配料加入平菇培养基中,研究出了一种新型的营养价值更为丰富的蘑菇—北芪菇(P15)。本实验选取北芪菇以及相同环境中生长的平菇进行多糖提取,并对其提取物的理化性质、结构及生物活性进行了初步的对比研究,主要研究内容及结果如下:1、采用超声辅助热水浸提法提取P0/P15多糖,结合试验结果与实际操作的可行性,确定提取条件
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平菇（P0）是一种常见的食用菌,在我国种植广泛。随着对平菇研究的不断深入,人们将黄芪作为配料加入平菇培养基中,研究出了一种新型的营养价值更为丰富的蘑菇—北芪菇(P15)。本实验选取北芪菇以及相同环境中生长的平菇进行多糖提取,并对其提取物的理化性质、结构及生物活性进行了初步的对比研究,主要研究内容及结果如下:1、采用超声辅助热水浸提法提取P0/P15多糖,结合试验结果与实际操作的可行性,确定提取条件。最终确定的提取条件为:超声处理20 min,超声功率100 W,85℃热水提取2 h,料液比为1:10;此条件下P0多糖的得率为22.70±0.14%,P15多糖的得率为25.45±0.16%。2、对前面提取得到的蘑菇粗多糖进行分离、纯化。测得蛋白质的脱除率分别为84.49±0.63%和83.96±0.29%,多糖保留率分别为72.16±0.86%和68.29±0.69%;色素脱除率分别为68.74±0.06%和67.69±1.20%,多糖保留率分别为86.05±0.80%和84.30±1.53%;再将所得多糖进行柱纯化,得到多糖纯品P0OP-Ⅰ、P0OP-Ⅱ、P15OP-Ⅰ和P15OP-Ⅱ,含糖量分别为93.17±0.13%、90.56±0.48%、94.21±0.35%和90.16±0.17%。3、选择P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ进行初级结构的探究。通过UV扫描图谱和冻融实验发现,多糖纯化效果很好;红外扫描结果显示P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ含有甘露糖且由吡喃糖苷键连接;分子量分析结果显示P0OP-Ⅰ的相对分子质量为21706.96 Da,P15OP-Ⅰ的相对分子质量为20172.65 Da;单糖组成结果显示P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ主要由为Man、Glc UA、Glc、Gal和Ara五种单糖构成,其摩尔比分别为22.61:40.94:33.70:2.49:0.26和33.6:14.48:47.23:4.17:0.52。4、通过构建小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞体外模型,来研究P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ的免疫调节活性。结果发现多糖组分P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ能显著诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-α,且表现出较强的多糖浓度依赖效应。5、选择合适的MAPK和NF-κB信号通路抑制剂对多糖组分P0OP-Ⅰ和P15OP-Ⅰ诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-α的作用机制进行初步研究。发现它们主要通过激活RAW264.7细胞的NF-κB、JNK MAPK和Erk MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞释放NO,而刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α因子则是通过JNK和Erk MAPK信号通路;且多糖组分P15OP-Ⅰ的诱导活性普遍高于多糖组分P0OP-Ⅰ。本论文的研究结果为今后其他学者对北芪菇多糖的深入研究和它在多个领域的开发利用提供了一定的理论基础。
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