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研究背景根据2009年美国肿瘤协会最新的统计,美国新发前列腺癌患者是192,280例,每年有27,360名男性死于前列腺癌。为了更好的获得此疾病的信息,根据其他国家现有的报道,中国、德国、以色列、牙买加、瑞典、乌干达的男性尸检研究发现,大约有30%的人在50多岁时发生前列腺癌。现代的检测和治疗方法意味着许多前列腺癌患者可以在早期被发现并得到更有效的治疗。雄激素阻断疗法对于大多数的前列腺癌患者有效,但当前列腺癌变成雄激素非依赖性时则治疗无效。激素抵抗性发生是在前列腺癌的晚期阶段,而且是导致患者死亡的主要原因。因此,寻找一种治疗雄激素非依赖性前列腺癌的方法是非常必要的。目前认为,雄激素非依赖性前列腺癌的进展归因于多种雄激素受体的突变、受体酪氨酸激酶和黏着斑激酶过度表达、神经内分泌及白介素-6等。之前有报道称,蛙皮素、钙调节药唑来膦酸、肌醇六磷酸和蓝雪醌是用于治疗雄激素非依赖性前列腺癌的新型因子,但结果都不尽如人意。尽管在这一领域内开展了多方面的工作,但问题是如何有效的应对这一艰巨的挑战。近来,有体外实验提示两性蛋白-糖基化终末产物受体(RAGE)相互作用与前列腺癌病情进展有关。值得注意的是,在前列腺癌的3种细胞品系(LNCaP、PC-3和DU145)中,雄激素非依赖性细胞系DU145表达的RAGE和两性蛋白比其他细胞系要高。因此,RAGE基因可能在雄激素非依赖性前列腺癌进展中起重要作用。目的本研究通过构建针对人糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation endproducts, RAGE)基因的特异性短发夹RNA (small hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145的生物学行为的影响。研究方法通过有限稀释法,以AGE-BSA刺激的DU145细胞为对照,应用RT-PCR及FCM筛选RAGE高表达的亚克隆细胞株。设计、合成4种RAGE特异性短链寡核苷酸,另设随机序列作为阴性对照,克隆至psi-U6质粒载体中,转染至之前筛选的RAGE高表达的亚克隆细胞株(Sub DU145-2C1, SD-2C1),荧光显微镜观察转染后情况,实时荧光定量PCR技术检测转染后RAGE mRNA的表达,蛋白印迹法测定转染后RAGE蛋白的表达,CCK-8法检测shRNA对细胞增殖的影响,FCM检测细胞生长周期,倒置显微镜观察细胞形态变化,划痕实验观察细胞迁移能力。结果1、成功筛选了高表达RAGE的前列腺癌细胞株：SD-2C1。2、筛选出最有效抑制RAGE基因表达的shRNA表达载体RAGE shRNA-1,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,蛋白表达的抑制率为27%(P<0.05)。3、在体外实验,沉默RAGE基因可抑制细胞的增殖生长(P<0.05)。4、在体外实验,沉默RAGE基因可干扰细胞的生长周期,与阴性对照组比较,转染RAGE shRNA-1组的细胞周期发生G2／M延迟。5、在体外实验,沉默RAGE基因后细胞形态发生了改变。6、在体外实验,沉默RAGE基因对细胞迁移能力无明显影响,差距无统计学意义(P>0.05)。结论在本研究中,构建的RNA干扰表达载体RAGE shRNA成功转染SD-2C1细胞株,有效下调RAGE基因的表达水平,抑制了细胞增殖,干扰了细胞的生长周期,细胞形态发生了变化。沉默该基因为激素非依赖性前列腺癌的治疗和预防提供新的分子靶点。