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目的:探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-dC)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和甲基化结合蛋白MeCP2的RNA干扰载体Psilencer-2.1-U6- MeCP2对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:人肺腺癌细胞株A549细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养。利用阳离子脂质体将Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒(由本课题组成员2007年构建鉴定,且在mRNA水平和蛋白水平证明可以明显降低MeCP2蛋白的表达)转染到A549细胞中。试验分八组:(1)对照组:不给任何处理的A549细胞;(2)实验组1:A549细胞接种24h后,加入5μmol/L的5-aza-dC;(3)实验组2:A549细胞接种24h后,加入300nmol/L TSA;(4)实验组3:经稳定转染的A549细胞;(5)实验组4:A549细胞接种24h后,加入5μmol/L的5-aza-dC和300nmol/L TSA;(6)实验组5:稳定转染的A549细胞接种24h后,加入5μmol/L的5-aza-dC;(7)实验组6:稳定转染的A549细胞接种24h后,加入300nmol/L TSA;(8)实验组7:稳定转染的A549细胞接种24h后,加入5μmol/L的5-aza-dC和300nmol/L TSA。Annexin V/PI双染法测定各组细胞培养72 h后的凋亡情况;RT-PCR检测各组细胞培养72h后C/EBPαmRNA的表达。结果:(1)Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒能够稳定转染到A549细胞中;(2)5-aza-dC、TSA和Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒能够诱导A549细胞凋亡,且两两联合处理组A549细胞凋亡率明显高于单处理组(均P <0.01)、三者联合处理组A549细胞凋亡率高于两两联合处理(均P <0.05),差别有统计学意义;(3)5-aza-dC、TSA和Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒能够上调C/EBPα基因mRNA的表达,且两两联合处理组A549细胞中C/EBPαmRNA的表达水平高于单处理组(均P <0.01)、三者联合处理组A549细胞中C/EBPαmRNA的表达水平高于两两联合处理(均P <0.05),差别有统计学意义;(4)细胞C/EBPαmRNA的相对表达量及细胞凋亡率在试验组与对照组组间比较,差异均有统计学意义(P <0.01);(5)5-aza-dC、TSA和Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒在诱导细胞凋亡、增强C/EBPαmRNA的表达方面比较,差别均无统计学意义。结论:与单用5-aza-dC、TSA、Psilencer-2.1-U6- MeCP2重组质粒相比,联合运用能够更好的增强C/EBPα基因mRNA的表达,诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且三者联合运用的效果最显著,这将为去甲基化多药联合治疗肺癌提供理论依据。