黄绿青霉素(Citreoviridin,CIT)是一种主要由黄绿青霉菌(Penicllium citreonigrum)分泌产生的具有毒性的次级代谢产物,广泛的存在于谷类农作物及其相关的农副产品中。它具有心脏血管毒性、神经毒性、遗传毒性和致畸性。但是目前国内外还没有报道基于抗CIT单克隆抗体的免疫检测方法。本研究以建立一种快速有效的免疫检测方法为目的,制备特异性强、亲和力高的抗CIT单克隆抗体。通过琥珀酸酐和碳二亚胺两步法成功地制备了人工完全抗原CIT-KLH和CIT-BSA。以CIT-KLH作为免疫抗原免疫Balb/c小鼠,CIT-BSA作为检测抗原包被酶标板,检测和筛选抗CIT的抗体。取抗血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后来制备杂交瘤细胞。两次细胞融合实验的融合率均为100%,阳性率分别为3.77%和5.0%。通过亚克隆最终获得8株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1A12、3B4、3H6、8D8、8G5、6B8、8D6和10C9,其中8D8亚型为IgG1,其他7株的都属于IgM。将8D8单克隆细胞株经过扩大培养,体内诱生腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化获得较纯的IgG抗体,其蛋白浓度为6.6mg/mL,效价为1:1.28×10~5,亲和力为4.57×10~8L/mol。以优化条件建立ic-ELISA标准曲线的检测线性范围为11.02～2370.48ng/mL,最低检出限为11.86 ng/mL,批间和批内样品回收率分别为86.83%～92.28%,85.0%～95.72%,变异系数均小于5%。本研究通过基于抗CIT单克隆抗体建立ic-ELISA方法最佳工作条件为:包被原CIT-BSA最佳工作浓度为0.5 μg/mL,包被时间为37℃,2 h或者4℃过夜;最佳封闭液为5%PBSM,37℃封闭2 h;单克隆抗体最佳稀释度为1:40000;酶标二抗(HRP-IgG)的最佳稀释度1:8000;加底物显色时间为10 min。本研究获得的单克隆抗体为快速检测出CIT奠定了坚实的基础,可用于制备基于单克隆抗体ELISA检测试剂盒、胶体金快速检测试纸条和免疫传感器法等。