目的:局灶脑缺血/再灌注损伤时会促发剧烈的炎症反应,其发病及病理发展离不开细胞信号转导,其中当属NF-κB(Nuclear Factor-κB)信号通路最为关键。IKKβ(IκB kinasesβ)则为细胞外刺激因子激活NF-κB p65经典信号通路必需的IKK亚基。本研究通过基因干扰的方法明确IKKβ在电针抑制大鼠局灶脑缺血/再灌注炎性损伤中的所起作用,并探讨其机制。方法:采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,并运用电针刺激大鼠“百会”穴(GV 20)及病侧“四关”穴(合谷LI 4/太冲LR 3),采用基因沉默及过表达技术干预IKKβ基因。将成年雄性无特定病原体级别(specific pathogen free,SPF)的SD大鼠205只随机分为假手术组(Sham,n=30)、局灶脑缺血/再灌注组(I/R,n=50)、局灶脑缺血/再灌注+空病毒载体对照组(I/R+vehicle,n=20)组局灶脑缺血/再灌注+电针组(EA,n=30)、局灶脑缺血/再灌注+IKKβ沉默组(sh IKKβ,n=25)、局灶脑缺血/再灌注+IKKβ过表达组(IKKβover-expression,n=25)、局灶脑缺血/再灌注+IKKβ过表达+电针组(IKKβover-expression+EA,n=25)。设有5个时间点,分别为缺血/再灌注后6h、12h、24h、48h及72h。对实验大鼠进行神经系统评分,测定大鼠脑梗死体积,运用Western blot等检测IKKβ、p IKKβ、p IκBα及胞核NF-κB p65蛋白的变化水平,共聚焦免疫荧光术观察小胶质细胞及IKKβ定位及表达情况,运用ELISA检测炎症细胞因子(IL-6、IL-10)的含量变化情况。结果:1.再灌注后24 h I/R组较Sham组神经功能评分明显降低(P<0.01),sh IKKβ组较I/R组升高(P<0.05),同时,IKKβover-expression组较之降低(P<0.05)。但电针治疗于24 h时未见明显疗效(P>0.05)。再灌注后72 h时,EA组较I/R组神经系统评分取得明显改善(P<0.05)。sh IKKβ组评分较I/R组高(P<0.05),同时,IKKβover-expression组评分较I/R组低(P<0.05),另外,在IKKβover-expression+EA组,神经系统评分得到明显改善(P<0.05)。2.再灌注72 h时,I/R组较Sham组梗死体积明显增加(P<0.01),电针治疗后梗死体积得到显著减少(P<0.05)。sh IKKβ组梗死体积较I/R组减少(P<0.01),同时,IKKβover-expression组评分较I/R组升高(P<0.01)。另外,与IKKβover-expression组相比较,IKKβover-expression+EA组的梗死体积明显减少(P<0.05)。3.I/R组较Sham组p IKKβ于各时间点均升高(P<0.01)。而于24h、48 h和72 h 3个时间点,经电针干预后,p IKKβ的表达较I/R组明显降低(P<0.05)。在24 h时,sh IKKβ组较I/R组,IKKβ、p IKKβ明显减少(P<0.01),p IκBα显著降低(P<0.05),其下游胞核NF-κB p65同时也减少(P<0.01)。另外,IKKβover-expression组较I/R组,IKKβ、p IKKβ明显增加且p IκBα显著提高(均P<0.01),其下游胞核NF-κB p65明显增加(P<0.05)。而在IKKβover-expression+EA组IKKβ、p IKKβ减少且p IκBα减少(均P<0.05),其下游胞核NF-κB p65也降低(P<0.05)。4.免疫荧光双标显示再灌注后24 h于大脑缺血皮质区,小胶质细胞活化明显,部分细胞胞体变大,轴突回缩。而sh IKKβ组,IKKβ在小胶质细胞胞浆中表达显著减少(P<0.01)。在IKKβover-expression组,小胶质细胞多呈激活态,其中的IKKβ表达也显著增加(均P<0.01)。而通过电针治疗,缺血皮质区活化的小胶质细胞减少,IKKβ在小胶质细胞中的表达也明显降低(均P<0.05)。5.ELISA实验观察到sh IKKβ组较I/R组IL-6含量减少(P<0.05),IL-10含量增加(P<0.05)。同时,IKKβover-expression组较I/R组,IL-6含量增加(P<0.05),IL-10含量减少(P<0.05).另外,与IKKβover-expression组相比较,IKKβover-expression+EA组IL-6含量减少而IL-10含量增加(P<0.05)。结论:IKKβ基因沉默能明显抑制改善NF-κB p65通路介导的大鼠局灶脑缺血/再灌注后大脑缺血皮质区的炎症反应。而在IKKβ基因过表达后,神经功能评分降低,脑梗死体积增大,但在其基础上施加电针治疗,神经系统预后得到显著改善,显著抑制了IKKβ磷酸化激活,抑制了NF-κB p65通路,小胶质细胞激活得到改善。以上结果证明IKKβ的确参与了局灶脑缺血/再灌注后炎症反应过程,且本实验首次通过基因干扰的方法进行验证,发现电针治疗能够通过下调IKKβ表达从而抑制NF-κB p65通路达到改善大鼠局灶脑缺血/再灌注后神经功能评分,能够减少大鼠脑梗死体积的治疗目的;初步证实电针治疗能够下调IKKβ表达及其磷酸化激活态,随之抑制NF-κB p65入核转录从而调节局灶脑缺血/再灌注后早期促炎与抑炎因子的平衡,达到治疗局灶脑缺血/再灌注后早期炎症反应的功效。