目的：研究ATP2B1基因沉默对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）胰岛素敏感性的影响，并探讨所涉及的基础机制，寻找增强内皮细胞胰岛素敏感性的方法，为临床上治疗胰岛素抗抵患者的新药研发提供部分理论支持，降低胰岛素抵抗患者发生心血管疾病的风险。　　方法：将对数生长期的HUVEC细胞用0.25％胰蛋白酶消化计数后按0.5×106cells/孔的密度接种在6孔板中，采用riboFECTTMCP转染试剂盒分别将阴性SiRNA(Si-Neg）和ATP2B1基因沉默特异性SiRNA（Si-ATP2B1）转染到HUVEC细胞中，转染浓度均为100nM。此后，实验分三个部分进行干预和指标检测。第一部分，转染48h后，收集细胞，用Western Blot检测HUVEC细胞内质膜钙离子ATP酶-1(Plasma Membrane Calcium ATPase-1, PMCA1)蛋白表达水平、Fluo-3 AM钙离子荧光探针法测定HUVEC细胞内Ca2+浓度。第二部分，转染32h后，血清饥饿培养过夜（16h），分别用以下不同的干预方式处理细胞：1、不加任何干预；2、用100nM胰岛素刺激30min；3、用10μM钙螯合剂BAPTA-AM预处理90min，再加入100nM胰岛素刺激30min；4、用500nM钙离子载体A23187处理30min。四种不同的干预方式处理完成后，Western Blot检测HUVEC细胞内丝/苏氨酸激酶(serine-threonine kinase, Akt)及其磷酸化蛋白phospho-Akt(Ser473)（p-Akt）的表达水平。第三部分，转染32h后，血清饥饿培养过夜（16h），分别采用以下不同干预措施并进行指标检测：1、用30μM特异性钙调蛋白拮抗剂W7预处理30min，再加入100nM胰岛素刺激30min，干预完成后，Western Blot检测HUVEC细胞内p-Akt及Akt的蛋白表达水平；2、用100nM胰岛素刺激30min，收集细胞，免疫共沉淀法检测与钙调蛋白相关的Akt的水平。　　结果：　　1、ATP2B1基因沉默后HUVEC细胞内PMCA1蛋白表达情况：与阴性Si-Neg转染细胞比较，Si-ATP2B1转染细胞中PMCA1蛋白表达明显降低（P<0.05）。　　2、ATP2B1基因沉默后HUVEC细胞内Ca2+浓度变化：与阴性Si-Neg转染细胞比较，Si-ATP2B1转染细胞中Ca2+浓度明显升高（P<0.05）。　　3、胰岛素对转染细胞中p-Akt及Akt蛋白的影响：与各自没有用胰岛素刺激的转染细胞比较，100nM胰岛素刺激后，Si-Neg与Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt的比值都明显升高（P<0.05），胰岛素可以诱导HUVEC内皮细胞Akt磷酸化。与100nM胰岛素刺激的Si-Neg转染细胞比较，100nM胰岛素刺激的Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt比值明显升高（P<0.05），ATP2B1基因沉默对胰岛素诱导的Akt磷酸化具有促进作用，能增加内皮细胞胰岛素敏感性。　　4、钙螯合剂BAPTA-AM对转染细胞中p-Akt及Akt蛋白的影响：与没有用钙螯合剂BAPTA-AM预处理的Si-ATP2B1转染细胞比较，BAPTA-AM预处理的Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt的比值明显下降（P<0.05），ATP2B1基因沉默依赖于细胞内升高的Ca2+浓度促进Akt磷酸化来增加内皮细胞胰岛素敏感性。　　5、钙离子转运体A23187可将细胞外Ca2+转运到细胞内，与各自没有用A23187处理的转染细胞比较，A23187处理后，Si-Neg与Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt的比值都明显升高（P<0.05），A23187表现出与胰岛素同样的诱导HUVEC内皮细胞Akt磷酸化的作用。与用A23187处理的Si-Neg转染细胞比较，用A23187处理的Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt的比值明显升高（P<0.05），ATP2B1基因沉默通过细胞内升高的Ca2+浓度促进Akt磷酸化来增加内皮细胞胰岛素敏感性。　　6、特异性钙调蛋白拮抗剂W7对转染细胞中p-Akt及Akt蛋白的影响：与没有用W7预处理的Si-ATP2B1转染细胞比较，用W7预处理的Si-ATP2B1转染细胞中p-Akt/Akt比值明显降低（P<0.05），ATP2B1基因沉默促进Akt磷酸化来增加内皮细胞胰岛素敏感性的过程可以通过钙调蛋白介导。　　7、免疫共沉淀结果显示，与Si-Neg转染细胞比较，Si-ATP2B1转染细胞中与钙调蛋白结合的Akt的水平明显升高（P<0.05），ATP2B1基因沉默经由钙调蛋白对Akt磷酸化产生影响。　　结论：ATP2B1基因沉默可以增加 HUVEC内皮细胞的胰岛素敏感性，这可能是通过Ca2+/钙调蛋白信号通路促进Akt磷酸化途径介导产生的。