【摘 要】
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目的:通过分析bcr-abl多肽诱导正常人T细胞克隆性增殖和TCR Vα和TCR Vβ基因选用情况,获得识别bcr-abl多肽的特异性TCR基因,并构建TCR Vα和TCR Vβ双基因表达载体及分析其体外
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目的:通过分析bcr-abl多肽诱导正常人T细胞克隆性增殖和TCR Vα和TCR Vβ基因选用情况,获得识别bcr-abl多肽的特异性TCR基因,并构建TCR Vα和TCR Vβ双基因表达载体及分析其体外转染细胞和表达特点,从而为研制TCR转基因获得白血病抗原特异T细胞的研究提供实验依据。方法:利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增。收集诱导后第10天和第18天的细胞,RT-PCR-基因扫描分析其TCR Vα和TCR Vβ基因谱系变化特点。同时,利用基因克隆技术构建Jurkat细胞独特型的TCR Vα1及TCR Vβ8亚家族基因的TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,通过限制性酶切分析、序列分析、RT-PCR、间接免疫荧光、流式细胞术、斑点杂交以及SDS-PAGE-Western-blot等手段鉴定重组表达载体的正确性以及转染A549、K562和Molt4细胞后基因及蛋白的表达情况。结果:(1)bcr-abl多肽诱导后出现了TCR Vα11、Vβ22、Vβ24亚家族T细胞由多克隆性演变为寡克隆性增殖趋势,提示了多肽可诱导此3个亚家族出现优势利用及克隆性增殖的特点。(2)成功构建了两组TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,该表达载体转染A549、K562和Molt4细胞后,可表达相应的mRNA和蛋白。结论:获得bcr-abl多肽诱导的正常T细胞(HLA-A0201限制性)所表达的TCR Vα和TCRVβ基因谱系和克隆性增殖的特点。成功构建了独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8双基因表达载体,为利用特异性TCR基因修饰T细胞的研究提供了基础资料。
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