以细胞基质生产病毒疫苗具有安全高效的特点,如鸡成纤维细胞（DF-1）、非洲绿猴肾细胞（Vero）等常用细胞作为基质在疫苗生产中发挥巨大作用。然而,由于细胞免疫的原因,很多类型的病毒并不能在这些细胞中扩增,或者扩增效率很低。随着人们对免疫信号通路相关基因研究的深入,采取基因编辑技术将细胞或动物的内源性免疫基因进行敲除,可从根本上改变细胞免疫性状,进而优化疫苗生产工艺,提高疫苗生产效率。STAT1基因在信号转导和转录激活的关键性作用可影响免疫信号通路发挥作用。本研究,我们对鸡DF-1细胞中STAT1基因进行敲除,探究STAT1-ko细胞对传染性法氏囊病毒（IBDV）和新城疫病毒（NDV）病毒增殖的影响。研究结果如下:一、通过CRISPR/Cas9技术敲除鸡DF-1细胞中的STAT1基因为了得到STAT1基因稳定敲除的鸡DF-1细胞细胞系,针对STAT1第二外显子上设计了3个sg RNA打靶位点,将构建好的sg RNA敲除载体共同转染鸡DF-1细胞,通过挑单细胞克隆的方式收集转染阳性细胞并进行PCR鉴定和测序分析。结果显示,STAT1基因的打靶位点发生了碱基片段缺失,造成了编码阅读框的移码突变,说明我们得到了STAT1稳定敲除的鸡DF-1细胞系。为了验证敲除STAT1基因后对鸡DF-1细胞生长速度和细胞形态的影响,首先,在显微镜下观察细胞形态;其次,采用细胞计数绘制两种细胞的生长曲线;随后,通过q-PCR检验两种细胞生长与黏附相关基因编辑表达量。结果显示,与野生型DF-1细胞相比,STAT1-ko细胞生长速度和细胞形态没有显著差异,细胞生长及黏附相关基因的表达量差异不显著,说明敲除STAT1基因并未对鸡DF-1细胞的生长速度和细胞形态产生影响。二、敲除STAT1基因对DF-1细胞感染IBDV的影响本试验用IBDV感染STAT1基因缺失和野生型两种细胞,然后对其进行q-PCR和TCID50检验,探究敲除STAT1基因对鸡DF-1的影响。结果显示,与野生型DF-1细胞相比,STAT1-ko细胞中STAT1下游的OASL等免疫相关基因表达量显著降低,IBDV的基因表达量和滴度均显著提高,说明STAT1-ko细胞对IBDV的敏感性提升,IBDV在细胞内的增殖速度显著提升。三、敲除STAT1基因对鸡DF-1细胞感染NDV的影响本研究用NDV感染STAT1基因缺失和野生型两种细胞,然后对其进行q-PCR和TCID50检验,探究敲除STAT1基因对鸡DF-1的影响。结果显示,与野生型DF-1细胞相比,STAT1-ko细胞中STAT1下游的OASL等免疫相关基因和干扰素等免疫基因的表达量均显著降低,NDV基因的表达量和病毒滴度均显著提高,说明STAT1-ko细胞对NDV的敏感性提升,NDV在细胞内的增值速度显著提升。综上所述,本研究通过CRISPR/Cas技术对鸡DF-1细胞中的STAT1基因进行敲除,IBDV和NDV在STAT1缺失鸡DF-1细胞增殖速度提高。研究结果为鸡STAT1基因后续研究和鸡DF-1细胞的后续应用提供了重要参考。