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近年来,副猪嗜血杆菌（Haemopilus parasuis,HPS）和猪链球菌（Streptococcus Suis,SS）已成为影响猪群健康的重要病原体,均可引发猪群接触性呼吸道传染病,给养猪业造成了不小的损失。HPS和SS主要引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎和败血症等。目前已知的HPS和SS血清型分别有15和35种。HPS在中国的流行血清型主要有1、4、5和13型,SS流行的血清型主要有1、2、7和9型。虽然猪群可以通过接种疫苗预防HPS和SS,但两种细菌均存在多种血清型,已有的商业化疫苗无法对所有血清型全面覆盖,所以在猪群感染HPS或SS后,常用的治疗方法依然是使用抗生素。但随着抗生素的大量使用,很多菌株产生耐药性,使临床治疗效果不佳。因此对HPS和SS进行血清分型,研究其耐药性和潜在毒力因子可以为防控该类细菌病提供思路。本研究对所有菌株血清型、药物敏感性、毒力因子、NAD依赖性进行研究。主要内容及结果如下:1.副猪嗜血杆菌和猪链球菌的分离鉴定2021年3月至2022年1月,从海南3个规模化猪场采集患病猪脑组织、肺脏、关节积液等病料322份。经过细菌培养特性实验、生化实验及PCR分型鉴定,从中成功鉴定出32株HPS和38株SS。结果发现,海南HPS主要流行4型（50%）、不可分型（40.6%）、1型（9.3%）;SS主要流行21型（34.2%）、不可分型（26.3%）、9型（21.1%）和8/21型（18.4%）。2.副猪嗜血杆菌和猪链球菌的培养特性研究HPS在TSA固体培养基（血清+NAD）和巧克力琼脂培养基上生长良好。对HPS进行生长曲线测定,将HPS 1型和4型分别接种于TSB（血清+NAD）、TSB（血清）和TSB（无任何添加）培养基中,由OD600nm值反应细菌的生长速度以及NAD依赖性。结果显示,本实验的HPS分离株具有严格的NAD依赖性,且对培养环境适应能力较强,生长速度较快,HPS 1型和4型分别在第11 h和10 h时OD600nm值达到峰值。SS在鲜血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基和TSA固体培养基（血清+NAD）上生长状态良好,在鲜血琼脂培养基上可见明显的β溶血环。对SS进行生长曲线测定,结果显示SS分离株生长速度均较快,在7 h左右OD600nm值即可达到峰值。3.副猪嗜血杆菌和猪链球菌药物敏感性选取20种临床常用的抗菌药物,用药敏纸片法对32株HPS和38株SS临床分离株进行了药敏试验。结果显示,所有HPS对卡那霉素、新霉素、链霉素和磺胺类药物均耐药,耐药率达到100%;对β-内酰胺类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类药物、氯霉素、氟苯尼考、多西环素和大观霉素均高度敏感,耐药率基本为0;对庆大霉素和阿米卡星中度敏感。SS药敏试验结果显示,所有SS对磺胺类药物、大环内酯类药物、卡那霉素、新霉素、链霉素、庆大霉素和阿米卡星均耐药,耐药率为100%;对β-内酰胺类药物、大观霉素高度敏感,耐药率均为0;对氯霉素、氟苯尼考、多西环素和喹诺酮类药物中度敏感,中敏率均达60%以上。通过PCR对32株HPS和38株SS临床分离株的耐药基因进行了检测,发现1型HPS仅检出喹诺酮类（gyr A、gyr B、par C、par E）耐药基因,其携带率分别为100%、66.6%、100%、100%;4型和不可分型的HPS均检出了磺胺类（SulⅠ和SulⅡ）、四环素类（Tet A和Tet B）、氟苯尼考（folk）、喹诺酮类（gyr A、gyr B、par C、par E）耐药基因,2种HPS对耐药基因携带率均大于75%。SS耐药基因PCR检测结果显示,9型和8/21型SS均检出了磺胺类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖苷类和大环内酯类耐药基因,其耐药基因携带率均大于70%,尤其磺胺类,耐药基因携带率均为100%。其中9型SS还检出了氟苯尼考类耐药基因,携带率为75%;21型SS检出喹诺酮类（par E）、氨基糖苷类（aph A1、str A和str B）和大环内酯类（erm B）耐药基因,其携带率分别为84.6%、100%、92.3%、84.6%、92.3%;不可分型的SS携带率与21型相近。4.副猪嗜血杆菌和猪链球菌毒力基因的检测通过PCR对32株HPS和38株SS各型分离株的毒力基因进行了检测,发现1型HPS菌株检出毒力基因11种,4型HPS菌株检出8种,不可分型的HPS检出7种,其中毒力基因vta2、vta3、hhd A、hhd B、cdt B和cdt C在3种血清型的HPS中高度保守,携带率几乎达100%。9型和8/21型SS均检出8种毒力基因,21型和不可分型SS均检出6种毒力基因,其中毒力基因orf2、Znu A、adpb、Str A、Gapdh和Fbps在4种血清型的SS中高度保守,Gapdh和Fbps携带率为100%,其余4种毒力基因携带率达70%以上。