论文部分内容阅读
盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一种单细胞真核绿藻,它不仅能在高盐环境中生存,而且具有较强的抗紫外特性.该文在已克隆到盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶基因(Ds64PHR)的基础上,应用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris,Pp)重组蛋白表达系统,将Ds64PHR导入巴斯德毕赤酵母中进行高效的表达,并对该基因在真核生物中抗紫外功能进行初步验证.取得的主要研究结果如下:1.首先采用高压电击法转化毕赤酵母细胞,通过正交实验优化影响Pichiapastoris转化效率毕赤酵母的转化条件参数,包括电击电压,制备感受态的细胞培养浓度,质粒DNA的浓度,担体DNA的加入,电击后的复苏等.初步得出电击电压1500V,培养细胞浓度OD<,600>=1.3时,质粒浓度100ng/μ L,总量500ng-1μ g时转化率最高.且在加有担体DNA时及电击后进行复苏时能较大的提高其电转化效率;2.构建了能在Pichia pastoris的高效表达的重组型的表达载体pGAPZB-Ds64PHR并进行了分子生物学验证;3.将表达载体pGAPZB-Ds64PHR重组到Pichia pastoris基因组DNA中,构建GS115-Ds64PHR工程菌并进行了分子生物学验证.4.应用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析工程菌GS115-Ds64PHR表达外源蛋白Ds64PHR的能力及Ds64PHR表达水平与抗紫外能力的关系,发现它们之间并不是正相关的关系.还证明Pichiapastoris也能作为验证外源基因功能的宿主菌.