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多种胺类物质参与的蛋氨酸循环是有助于许多哺乳动物健康的主要途径之一,其在动物体内的多种代谢途径相互之间有协同和竞争的关系,并影响其相应的生物学功能,但关于蛋氨酸循环的具体代谢机制及生理作用的解释尚不完整。通过对参与蛋氨酸循环代谢物质的检测,可以了解该代谢过程,更深层次的理解胺类代谢物在生命活动中的作用和机制。主要内容如下:(1)LC-MS是测定胺类代谢物的重要分析技术之一,但由于胺类的高极性、高水溶性及碱性等特点,使得难以在反相色谱柱中保留,离子抑制效应严重。为了改善色谱分离及提高灵敏度,利用化学衍生结合LC-MS对胺类物质进行定量分析。本文选取丹磺酰氯为衍生化试剂,考察了最佳衍生条件:p H为9.0,温度40°C,反应20min,不需要催化剂。在此条件下的衍生效率接近100%。通过色谱及质谱行为得知:衍生后引入疏水基团有利于色谱分离,引入易质子化基团易产生共同碎片离子。衍生后的灵敏度提高了1-3个数量级,衍生产物能在4°C下稳定保存3天。(2)血浆中复杂的基质对胺类的检测造成了极大干扰。因此,建立了稳定同位素结合LC-MS测定胺类代谢物的新方法。以丹磺酰氯和氘代丹磺酰氯作为一组同位素质谱探针,在无需使用分析物同位素内标的基础上,实现了对血浆样品中13种胺类物质的同时检测。血浆样品衍生最佳丹磺酰氯浓度为15 mg/m L,三(2-羧乙基)膦(TCEP)浓度为250 mg/m L。得到的标准曲线R~2在0.9859-0.9996之间,定量限(LOD)在0.006-1.036μg/L之间,检出限(LOQ)在0.020-3.419μg/L之间。猪血浆加标回收实验的日内RSD在1.2%-11.7%之间,日间RSD在0.3%-20.4%之间,回收率在71.8%-125.0%之间,这显示出本方法有较强的抗基质干扰能力。(3)考察母猪妊娠时期不同水平蛋氨酸的添加对其相关代谢物的影响,能够为蛋氨酸水平的调控提供理论支持。通过差异分析发现:蛋氨酸水平的改变只对胆碱、S-腺苷蛋氨酸、胱硫醚、丝氨酸、半胱氨酸和牛磺酸这6种代谢物造成显著差异,其中胆碱、S-腺苷蛋氨酸、胱硫醚、半胱氨酸及牛磺酸呈现出相同的变化趋势。蛋氨酸中等水平的添加导致这些代谢物含量最高,其次是高水平蛋氨酸浓度,最后是低水平。本文运用丹磺酰氯衍生,建立了稳定同位素结合LC-MS测定胺类代谢物的新方法,并成功应用于复杂基质样品-血浆中13种胺类物质的同时检测。研究结果为考察母猪妊娠时期蛋氨酸的添加及其相关代谢物的检测提供了技术支持,为调节母猪营养及猪仔的胚胎发育提供了理论依据。