细胞周期素A(cyclinA)是细胞周期的一种正性调节因子，是人类cyclins家族中的一个主要成员，它首先是在原发性肝癌细胞中与HBV DNA整合部位上检测到的，并认为这种整合作用有致癌性。cyclinA在DNA合成前的G1晚期出现，存在于细胞核内，作为调节亚基与相应的催化亚基—细胞周期素依赖性激酶(cyclins dependent kinases，CDK)中的CDK2、CDC2结合，参与细胞DNA复制、合成，并促进细胞进入有丝分裂，是细胞越过并顺利完成S期、G2／M期等各程序所必须的因子，它的正常表达代表正常的细胞增殖活性。 若cyclinA异常表达，则使错配或合成不完整的DNA丧失修复时间而直接进入细胞周期引起异常的细胞增殖，是肿瘤发生的原因之一。目前认为cyclinA在多种肿瘤中有异常高表达，而且是肿瘤细胞恶性增殖及预后不良的指标。对于cyclinA在白血病患者中的表达及其作用国内外的报道不多，仅认为cyclinA在白血病细胞中有高表达并且与细胞的S期及G2／M期细胞所占的比例有明显的正相关性，是白血病细胞增殖的一种新的指标，可能对判断预后有帮助。因此我们的实验通过探讨cyclinA在急慢性白血病患者中的表达，希望明确其在白血病发病过程中所起的作用，与其他细胞周期调控因子(cyclinA1、cyclinB1、cyclinG1及P21cipl)之间的关系，了解其表达异常与临床白血病患者的分型、分期及预后(复发、耐药、缓解)的关系：希望为临床诊断、化疗药物的选择及判断预后提供帮助。 反义核酸技术是利用反义RNA抑制或封闭目的基因的表达，现该技术已被广泛应用于肿瘤及遗传性疾病的研究之中，它可通过封闭特异的癌基因达到基因导向治疗肿瘤的目的。cyclinA在白血病细胞中有高表达是众所周知的，我们希望设计一个特异的cyclinA反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodexynucleotide，ASON)封闭cyclinA的表达，探讨cyclinA ASON对体外培养的白血病细胞增殖、凋亡的调控作用，并用 中文摘要脂质体转染提高细胞内摄取反义核酸的浓度，比较两种导入方法的抑制效率，选取效率高的导入方法在体内进行裸鼠成瘤实验进一步证实其功能，从分子水平揭示CyClinA对白血病细胞恶性增殖的作用，希望为基因治疗白血病提供一个新的思路。l 细胞周期素A在成人急性白血病思者中的表达与意义 目的 探讨细胞周期素A＊yClind）在成人急性白血病（AL）患者中的表达及其临床意义。 方法 采用流式细胞术及 RTICR法对 100例 AL患者及 10例正常人进IT cyclinA、cyclinAI、cyclinBI． cyclinGI、PZlc…蛋白水平及mRNA水平的检测，并对其中cycliM阳性表达的患者的PCR扩增产物进行DNA测序分析。 结果 门）在AL＄者中CyClinA蛋白水平在细胞周期中的分布无异常，即 GO／GI期出现，在 S期增加，于 GZ／M期达到高峰，与正常细胞中的CyClinA的分布一致，经测序分析发现CyCliM阳性扩增片段与基因库中的目标完全一致；CyClinA蛋自及InRNA的阳性率 （66．70，59．0O）和中位表达水平（18．50，0．539土 0．990）明显高于正常人T＜0刀 1＼ Q）CyClinA蛋白表达与其 InRNA水平之间有明显的正相关性（，叩．597，P司刀00L 说明CyClinA基因在转录水平上是可以调控的；臼）CyClinA蛋白及mlLvA水平与S期、GZ／M期细胞所占的比例呈正相关性（P＜0刀1人 N）cyclinA蛋白表达与AL ＄者中外周血WB C计数呈负相关性（，一o．295，P二0．mo人而与患者的年龄、性别、幼稚细胞所占的比例、FAB分型等无关0＞0刀5人 u）CyCliM的阳性率及表达水平在初治及复发的AL 患者之间无明显差异 0＞0刀5人 但两组患者的cyclinA表达水平均明显高于缓解期AL患者和正常对照组T＜0刀1人 对不同FA B分型的＊L患者进行分析，发现复发组 ALL患者的CyClinA蛋白表达水平门．4％）明显低于初治组（2．5％）k二 14．418，P二0＊22）；（6）CyCli帆高表达患者的 CR率 （87．9O，85．7o）明显高于低 表达患者（38．2o，53．3O）（P＜0．05），用多因素逻辑回归分析发现cyclinA蛋白、S期及GZ／M期细胞所占的比例、cyclinA mRNA是影响AL患者CR率的独立因素（其相对危险度分别为 10 石3、5．70、4．71；P＜0＊5）；（）在 AL患者中，cyclinA与 2 中文摘要 CyClinAI的InRNA表达水平之间无相关关系（，一0刀32，P＝0．801＊ 说明两者在AL中的作用不同，不能相互替代。CyCliMl基因的表达与 AL患者的FAB分型密切相关，即在AML患者中CyClinAI的表达水平 （0．7103士0．7241）明显高于ALL患者（0．2969士0．5358），而且尤其 是在AML（M3）型患者中CyCli“l的表达门．194士0尸357）明显高 于其他FAB分型组o功刀1人CyClind与CyClindl两者同时高表达的 10例患者全部 CR，而两者同时阳性低表达的 5例患者仅一例 CR；抢） CyClinA在AL患者中与