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卵巢癌是妇科肿瘤患者的主要死因之一，在我国其发病率逐年上升。上皮性卵巢癌是卵巢癌最常见的病理类型，约占卵巢癌总数的70%左右。卵巢癌早期无明显症状且易转移，是妇科三大恶性肿瘤中预后最差的。近年来，尽管外科治疗和联合化疗技术有了一定的改进，卵巢癌患者的预后仍没有明显改善。大多数卵巢癌患者就诊时已属晚期，且部分患者对化疗药物产生耐药，目前还没有较好的提高卵巢癌患者生存期的办法。因此，发现新的上皮性卵巢癌标志物是当务之急，以便提高早期卵巢癌诊断率和指导临床实践。选择性剪接是指将同一种前体mRNA剪接成多种不同的成熟mRNA剪接变异体，进而产生结构和功能不同的蛋白质的过程。mRNA的选择性剪接是真核生物产生蛋白质多样性与基因表达复杂性的主要原因。研究发现，在多种动物组织中，至少90%蛋白编码基因存在选择性剪接现象。选择性剪接导致了蛋白质的多样性，与多细胞动物细胞增殖、分化和死亡密切相关。研究选择性剪接的发生机制、调控以及相应蛋白异构体的功能对于肿瘤的诊断和治疗具有重要的意义。FoxM1是Forkhead转录因子家族中进化保守的重要成员之一，该家族的共同特征是具有进化保守的DNA结合区，称为“叉头框”或“翼状螺旋结构”。FoxM1是一个转录因子，能调节细胞有丝分裂，与细胞增殖、分化密切相关。该分子是一种原癌基因，在很多恶性肿瘤组织中高表达，且与一些肿瘤疾病的预后相关。FoxM1存在三种剪接方式即FoxM1a、b和c，FoxM1a的C端由于含有外显子A2丧失了转录活性，而FoxM1b和FoxM1c具有转录活性。因此，研究FoxM1剪接异构体的表达及功能至关重要。本课题旨在研究FoxM1三种剪接异构体在上皮性卵巢癌中的表达及分布，探讨FoxM1b与上皮性卵巢癌转移侵袭、顺铂耐药以及预后的关系，并研究其可能的相关分子机制。研究可分为三个部分：第一部分：FoxM1剪接异构体的表达与鉴定。我们首先用免疫组织化学染色检测了FoxM1在人正常组织中的表达，发现除人正常肾组织外，FoxM1在人正常组织中几乎不表达。免疫组织化学染色结果显示，与人肾癌组织相比，FoxM1在人正常肾组织中表达的阳性率更高。蛋白印记结果显示，FoxM1在6株上皮性卵巢癌细胞中均有不同程度的表达。与亲代细胞系相比，FoxM1在人上皮性卵巢癌高转移细胞株HO-8910PM和人上皮性卵巢癌顺铂耐药株A2780/CP70中的表达较高。我们用RT–PCR检测了FoxM1三种剪接异构体在上皮性卵巢癌细胞中的表达，发现FoxM1三种剪接异构体均能被扩增出来。剪接异构体特异性real-time PCR结果显示，与亲代细胞系HO-8910相比，FoxM1a在高转移细胞系HO-8910PM中的表达较低。FoxM1b在高转移细胞系HO-8910PM中的表达比其在HO-8910细胞中高，FoxM1b在顺铂耐药系A2780/CP70中的表达比其在A2780细胞中高。第二部分：FoxM1剪接异构体在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义。我们首先用免疫组织化学染色检测了FoxM1在上皮性卵巢癌组织中的表达，发现FoxM1蛋白的表达与上皮性卵巢癌淋巴结转移相关（P=0.012）。我们用剪接异构体特异性real-time PCR检测了FoxM1三种剪接异构体在正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中的表达。结果显示，FoxM1a mRNA在正常卵巢组织中的表达明显高于其在上皮性卵巢癌组织中的表达（P <0.001），而FoxM1b mRNA在正常卵巢组织中的表达明显低于其在上皮性卵巢癌组织中的表达（P=0.002）。统计分析结果显示，FoxM1bmRNA的表达水平与上皮性卵巢癌淋巴结转移相关（P=0.007），FoxM1b mRNA的高表达提示上皮性卵巢癌患者预后不良，并可以作为上皮性卵巢癌患者的独立预后因素（PFS, P=0.002; OS, P=0.003）。第三部分：FoxM1b参与调节上皮性卵巢癌侵袭转移和顺铂耐药的实验研究。为明确FoxM1b在上皮性卵巢癌侵袭转移中的功能，我们进行了细胞划痕、明胶酶谱、Transwell细胞迁移和侵袭等实验。我们发现用pcDNA3.1-FoxM1b转染的HO-8910细胞迁移和侵袭的能力明显上升，且MMP-2、MMP-9和VEGF-A的表达也随之升高；而用FoxM1shRNA转染的HO-8910PM细胞迁移和侵袭的能力明显降低，且MMP-2, MMP-9和VEGF-A的表达也随之下降。MTT检测结果显示，与对照组细胞相比，用pcDNA3.1-FoxM1b转染的A2780细胞顺铂耐药能力有所增强，而用FoxM1shRNA转染的A2780/CP70细胞顺铂耐药能力有所减弱。综上所述，FoxM1蛋白在除正常肾组织外的人正常组织中几乎不表达，在上皮性卵巢癌组织中呈上调表达状态。FoxM1三种剪接异构体在上皮性卵巢癌组织和细胞中均有一定程度的表达，FoxM1b的高表达与上皮性卵巢癌顺铂耐药和侵袭转移密切相关，且能调控MMP-2、MMP-9和VEGF-A的表达，FoxM1b mRNA的表达可以作为上皮性卵巢癌患者的独立预后判断因素。FoxM1b与上皮性卵巢癌联系紧密，是一个潜在的治疗上皮性卵巢癌的新靶点。