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本论文通过养殖试验和细菌攻毒试验分析了两种植物提取物黄芩苷和虾青素对中国对虾非特异性免疫酶及其免疫相关基因影响的研究。研究分为三部分:第一部分:黄芩苷对中国对虾非特异性免疫特性的影响本实验目的是研究不同浓度的黄芩苷对中国对虾体内免疫相关酶活性的影响。用含不同浓度梯度(0g·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1和150mg·kg-1)黄芩苷的饲料连续投喂健康的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),于给药第1,3,5,7,9,11 d采集实验对虾的血淋巴、肝胰腺、肌肉组织,测定不同组织的酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合酶(INOS)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,研究黄芩苷对中国对虾非特异性免疫酶活指标和解毒代谢能力的影响。实验结果表明,中、高浓度处理组血淋巴、肝胰腺、肌肉组织的ACP、INOS、SOD在第3d后呈上升趋势,分别达到峰值后趋于稳定状态,亦比同期对照组差异显著(P<0.05);低浓度黄芩苷处理组各种酶活性比同期对照组差异不显著(P>0.05),而低、中、高浓度处理组血淋巴LSZ酶活性比同期对照组差异极显著(P<0.01)。各种酶活亦存在组织差异性,其中ACP、CAT活性肝胰腺中活性最高,肌肉和血淋巴次之;而INOS、LSZ、SOD活性,血淋巴中最高,肌肉和肝胰腺次之。同时攻毒试验表明,黄芩苷能有效地降低试验组中国对虾的死亡率,提高免疫保护率,其中中浓度处理组的保护效果为最佳。因此,在饲料中添加黄芩苷能显著提高中国对虾的免疫相关酶活,增强非特异性免疫功能及降低中国对虾对病原的敏感性,增强机体抗病力,同时其研究结果也为黄芩苷在对虾养殖过程的应用提供了一定的理论依据。第二部分黄芩苷对中国对虾toll样受体基因的表达影响及抗鳗弧菌感染的研究本实验目的是研究不同浓度的黄芩苷对中国对虾体内免疫相关基因的影响。用荧光定量的方法检测投喂不同浓度的黄芩苷(0g·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1和150mg·kg-1)后,于给药第1,3,5,7,9,11 d后采集实验对虾肌肉、血淋巴和肝胰腺toll样受体mRNA表达量,以及用浓度为108cell/ml的鳗弧菌进行攻毒,注射剂量50ul/尾,并放养在200L的聚乙烯桶中,于0、12、24、48、72及96 h统计死亡率和免疫保护率。研究结果表明:三个浓度组黄芩苷对中国对虾肌肉、血淋巴和肝胰腺toll样受体mRNA表达量有显著的抑制作用。黄芩苷有可能是抑制NF-KB的活性可阻断炎症的关键启动步骤及其次级炎症反应,由此可以大胆推测出黄芩苷能够通过NF-KB途径间接的抑制TLR基因mRNA的表达量,从而抑制先天免疫系统产生炎症因子,相对提高了吞噬细胞的吞噬能力,增强天然免疫细胞的杀伤能力。同时攻毒试验表明,黄芩苷能有效地降低试验组中国对虾的死亡率,提高免疫保护率,其中中浓度处理组的保护效果为最佳。第三部分:虾青素和裂壶藻对中国对虾非特异性免疫特性的研究,在基础日粮中分别添加A组50mg/kg虾青素、B组100mg/kg、C组150 mg/kg、D组50mg/kg虾青素+10‰裂壶藻、E组100mg/kg虾青素+10‰裂壶藻、F组150mg/kg虾青素+10‰裂壶藻,空白组A,空白组B,于给药第1,5,10,15,20,25 d采集实验对虾的血淋巴、肝胰腺、肌肉和鳃组织非特异性酶活的变化情况,结果表明:(1)与对照组相比,中国对虾血清、肌肉和鳃组织蛋白含量均显著增加,而肝胰腺蛋白含量变化不大;在含有裂壶藻的低、中、高三个浓度组中,高浓度组蛋白含量高于同期其他各组。(2)虾青素和裂壶藻对中国对虾血清SOD活力影响具有显著的剂量效应,单独投喂虾青素高浓度组血清显著高于对照组,混合投喂虾青素和裂壶藻组SOD活力在第25d显著高于同期单独投喂虾青素各组。无论是单独投喂虾青素处理组还是混合投喂的各个浓度组肝胰腺和肌肉SOD活力均呈现显著上升的趋势,并且其影响具有显著的剂量效应。混合投喂组F对SOD活力影响最为显著。虾青素和裂壶藻对中国对虾鳃的T-SOD活力影响不大,只是在混合投喂组D在第5d出现峰值(3)单独投喂虾青素和混合投喂的各浓度组,血清、肝胰腺、肌肉CAT酶活力均高于同期的对照组,均有促进作用。其中混合投喂的各个浓度组血清CAT酶活力比单独投喂虾青素的处理组对虾血淋巴CAT酶活力差异性显著(P < 0.05),混合投喂E组在第10d有峰值。混合投喂F组肝胰腺CAT活力在第20d有峰值,并且是同期单独投喂虾青素C组CAT酶活的27倍。混合投喂组D组、F组对肌肉CAT酶活力呈现促进作用,且虾青素浓度越高促进作用越明显,呈现明显的剂量效应。混合投喂组和单独投喂组对中国对虾鳃CAT活力整体呈现促进作用,但是差异不显著。(4)不同浓度组对中国对虾血清MDA表现出不同的抑制作用。单独投喂虾青素组整体呈现出对中国对虾血清MDA活力先上升后下降的的趋势,而混合投喂虾青素和裂壶藻组血清MDA活力一直下降的趋势。其下降趋势不呈现一定的剂量关系,并且投喂虾青素和裂壶藻个浓度组没有明显的抑制优势。投喂混合各浓度组和单独投喂虾青素浓度组对肝胰腺和鳃MDA酶活性均表现出了显著的抑制作用,并且随着时间的推移则表现出逐渐降低的趋势。在整个过程中,随着时间的推移,各个浓度组对肌肉MDA酶都产生了一定的抑制作用。不同的是,在投喂后期,虾青素的浓度越高其抑制作用越大。