CO2对人宫颈癌Hela细胞VEGF-C和MMP9表达的影响

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目的通过建立体外模拟二氧化碳气腹环境模型,检测人宫颈癌Hela细胞中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化,从而探讨体外模拟二氧化碳气腹环境对宫颈癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,将细胞分为4组:CO2作用1h组、CO2作用2h组、CO2作用3h组、对照组。CO2作用1h组:将细胞置于3L无菌引流袋内,密闭后将无菌引流管与气腹机连接,将气腹机压力调至10mmHg,通入99.5%医用CO2气体,持续作用1h,然后常规培养24、48、72h。CO2作用2h组:按上述操作方法通入CO2气体,持续作用2h,然后常规培养24、48、72h。CO2作用3h组:按上述操作方法通入CO2气体,持续作用3h,然后常规培养24、48、72h。对照组:置于细胞培养箱中常规培养24、48、72h。采用实时荧光定量RT-PCR法及免疫细胞化学法检测各组Hela细胞VEGF-C、MMP9mRNA和蛋白的表达。结果(1)CO2作用1h组、CO2作用2h组、CO2作用3h组VEGF-C mRNA和蛋白的表达量均明显高于对照组(P<0.01)。(2)CO2作用1h组、CO2作用2h组、CO2作用3h组随培养时间延长,其VEGF-C mRNA和蛋白的表达量均于培养24h即达高峰,随后呈现下降趋势,但其表达水平仍高于对照组(P<0.01),对照组随培养时间延长,其VEGF-C mRNA和蛋白的表达量变化无统计学意义(P>0.05)。(3)在相同培养时间下,随CO2作用时间延长,其VEGF-C mRNA和蛋白的表达量逐渐增多,于2h达到高峰,随后逐渐下降,但其表达水平仍高于CO2作用1h组(P<0.01)。(4)CO2作用1h组、CO2作用2h组、CO2作用3h组MMP9mRNA和蛋白的表达量均明显高于对照组(P<0.01)。(5)CO2作用1h组、CO2作用2h组、CO2作用3h组随培养时间延长,其MMP9mRNA和蛋白的表达量均逐渐增多,于48h达到高峰,随后呈现下降趋势,但其表达水平仍高于24h(P<0.01),对照组随培养时间延长,其MMP9mRNA和蛋白的表达量变化无统计学意义(P>0.05)。(6)在相同培养时间下,随CO2作用时间延长,其MMP9mRNA和蛋白的表达量逐渐增多,于2h达到高峰,随后逐渐下降,但其表达水平仍高于CO2作用1h组(P<0.01)。结论(1)体外模拟CO2气腹环境可上调Hela细胞VEGF-C、MMP9mRNA和蛋白的表达。(2)随着模拟CO2气腹环境作用时间的延长,VEGF-C、MMP9mRNA和蛋白的表达量逐渐增多,达峰值后呈下降趋势。(3)随着培养时间的延长,VEGF-C、MMP9mRNA和蛋白的表达量增多达峰值后呈下降趋势。
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