血红素加氧酶-1在大鼠肝移植急性排斥反应中的免疫调节作用

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目的 建立MHC不相容的近交系大鼠原位肝移植(OLT)急性排斥模型,通过血红素加氧酶-1(HO-1)的诱导剂和抑制剂,分别诱导和抑制HO-1在肝组织中的表达,观察HO-1对大鼠肝移植术后肝功能的影响、移植物急性排斥分级、炎性细胞和细胞因子的表达,探讨HO-1在肝移植急性排斥反应中的免疫调节作用。 方法 1.采用“二袖套管法”,通过Wistar→Wistar(或SD)作为ROLT前期技能训练,然后用MHC不相容的DA为供体,LEW大鼠为受体,建立稳定的ROLT急性排斥模型。2.实验分组:(1)A组:供体术前24h用HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),5mg/kg,腹腔注射,n=9:(2)B组:供体术前24h用HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),20mg/kg,腹腔注射,n=9;(3)C组:供体术前24h,腹腔注射生理盐水2ml作为对照组,11=8。3.观察指标:(1)ROLT术后各组一般情况,包括精神状态、饮食、体重、皮肤的黄染程度;(2)术后3d,7d检测血清TBIL,ALT的水平;(3)病理学检查:术后3d,7d取各组肝脏组织标本,苏木素-伊红(H&E)染色,依照Banff标准对各组大鼠进行排斥反应分级。髓过氧化物酶染色(MPO)观察组织中的嗜中性粒细胞的表达;免疫组化观察单核巨噬细胞(CD68)、淋巴细胞(CD3)以及核因子NF-κB在肝组织中的表达。4.实时定量荧光PCR测定和分析各组肝组织中IL-2,IL-10,和TNF-α
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