【摘 要】
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【背景与目的】 不育与不孕的发病率约为10％-15％，其中由男方引起的约占50％，在男性不育中，常见的是无精子症或少精子症。早在1976年Tiepolo等在6位无精子症患者中发现Y染色体末端存在与精子生成有关基因的缺失，称无精子因子（azoospermia factor,AZF）。之后多位学者运用分子细胞遗传学技术将此因子定位于Y染色体长臂一区一带。AZF分成3个非重叠缺失亚区AZFa、AZFb、
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【背景与目的】 不育与不孕的发病率约为10％-15％，其中由男方引起的约占50％，在男性不育中，常见的是无精子症或少精子症。早在1976年Tiepolo等在6位无精子症患者中发现Y染色体末端存在与精子生成有关基因的缺失，称无精子因子（azoospermia factor,AZF）。之后多位学者运用分子细胞遗传学技术将此因子定位于Y染色体长臂一区一带。AZF分成3个非重叠缺失亚区AZFa、AZFb、AZFc，最近Kent-First等发现在AZFb和AZFc之间还有第4个AZF区域，称之为AZFd。之后Kobayashi等应用序列靶标在AZFc区域内分离出DAZ基因。越来越多的研究发现Y染色体上DAZ基因簇的部分或全部缺失是导致不育男性生精障碍的分子基础。DAZ缺失的患者除表现为单纯支持细胞综合征外，部分患者能产生少量精子或精原细胞。有研究表明，DAZ基因与精子生成有密切关系，它是AZF的重要候选基因之一，并且值得关注的是，10％-15％的原发无精与严重少精症患者出现DAZ基因的全部丢失。本研究通过构建pIRES2-EGFP-DAZ3重组质粒，将此重组质粒转染小鼠NIH3T3细胞，检测此重组质粒在真核细胞中的表达；同时转染金黄地鼠精子，经筛选后与其正常卵母细胞受精，检测DAZ基因在受精卵中的复制与表达，为转基因治疗男性不育探索新的途径。【材料和方法】 1)材料①LITMUS 28／DAZ3质粒；②pIRES2-EGFP质粒；③小鼠NIH3T3细胞；④精子，取自成熟雄性金黄地鼠附睾；⑤早期胚胎，取白成熟雌性金黄地鼠输卵管。2)方法①pIRES2-EGFP-DAZ3质粒构建，用酶切和PCR两种方法鉴定重组质粒是否构建成功；②细胞培养及转染，观察绿色荧光蛋白的表达，进一步证实该重组质粒是否能在体细胞中表达；③双测睾丸内注射pIRES2-EGFP-DAZ3重组质粒；④精子转染后筛选计数，并用PCR和荧光原位杂交技术（FISH）证实DAZ3 DNA是否进入筛选后的精子并与其基因组整合；⑤收集含雌雄原核的受精卵，制备间期核片，用FISH检测DAZ3 DNA是否在雄原核上整合；⑥收集受精卵、2-细胞胚
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