内皮素（endothelin，ET），是1988年由Yanagisawa等从猪血管内皮细胞培养液内分离提纯的一种含21个氨基酸残基的多肽，是目前已发现的最强缩血管物质之一，其缩血管能力，仅次于UrotensionⅡ。ET主要分布于心血管系统，参与高血压，心肌缺血，动脉粥样硬化，慢性肺动脉高压，肺心病等许多疾病的发病过程。已有报道外源性ET-1有致心律失常作用，过多表达的内源性ET-1在缺血性心律失常发生中起重要作用。因此，抑制ET-1基因表达，阻断ET-1过量生成有可能对ET-1过量表达所致疾病起防治作用。反义寡核苷酸技术是根据碱基互补原则设计出与目的基因mRNA特定片段，互补的短核苷酸片段，通过特异及非特异性机制抑制靶基因的表达，减少相关蛋白产物，达到治疗疾病的目的。本课题组设计的针对ET-1 mRNA的多种反义寡核苷酸，已筛选出能有效预防整体大鼠急性缺血性心律失常的ET-1反义寡核苷酸。本实验在离体灌流的雄性SD大鼠心脏，结扎左冠状动脉前降支（LAD），建立急性心肌缺血（缺氧）模型，观察LAD结扎后60min内急性缺血性心律失常的发生和心功能变化；ET-1 mRNA反义寡核苷酸（AS-ODN）等对离体大鼠心脏急性缺血性心律失常、心功能、心梗面积、心肌SOD活性以及超微结构的影响，进一步探明ET-1在急性缺血性心律失常发生中的作用，为急性缺血性心律失常的防治提供实验依据。 主要结果： 1．结扎离体大鼠心脏LAD引起的心律失常 第二军医大学 硕士学位论文 对照组 LAD结扎后10－30 min为心律失常多发时间段，20min左右为高峰 时段。LAD不结扎的NS预处理正常灌流对照组（n＝6）仅发生室早（ventricular premature beats，VPBs）及室早连发（salvo），6例未发生室速（ventrical tachycardia，VT）或心室纤维性颤动（ventrica fibrillation，VF），，0律失常 评分（arrhythmia score，AS）为1．00土0．00。低位（距LAD起始点snun）LAD结扎 后，6例均无VT／VF发生，AS＝0．83上0．41，AS，VPBs，salvos与正常灌流对照组 相比均无显著差异（P＞0．05）；中位（距 LAD起始点 3mm）LAD结扎后，6例均发 生VT，AS＝3．00土0．00，AS，VPBs，salvos，心律失常总数与正常灌流对照组和低位 组相比均有显著差异（P＜0．01）；高位（距LAD起始点Inun）LAD结扎后，6例均发 生VT，其中2例永久停搏，AS＝4．17土0．75，AS，VPBs，salvos，心律失常总数与 正常灌流对照组和低位组相比均有显著差异（P＜0．of），与中位LAD结扎组相比， ＊s，salvos，＊T，心律失常总数有显著差异o＜队01），＊PBs无差异（P＞0刀5）。 本研究选择距LAD起始点3nun处为结扎部位，建立离体大鼠心脏急性缺血 后心律失常模型。 2．ET八 反义寡核昔酸对离体心脏急性缺血性心律失常的影响 NS，S0DN及Scramble0DN3个预处理对照组各6例，LAD结扎后全部发生 VT三组，AS均为 3刀肚0刀0。AS，VPBs，salvos，心律失常总数比正常灌流对照组 显著增大或增多（P＜0．of人 NS，S－ODN，Scramble－ODN三组之间的AS，VPBs， Salvos，VT，心律失常总数相比无显著差异（P＞0刀5）。（2）AS－ODN 6 OD／Kg 组（n＝6），LAD结扎后全部发生VT组，AS－3．obeo＊0。该组AS，VPBs，salvos，心 律失常总数与NS S0DN及 Scramble－ODN3个对照组分别相比，无显著差异 （P＞0刀5），但VT时间明显减少。但AS，VPBS，VT与正常灌流对照组相比均明 显增多，差异非常显著（P＜0．of人（3）AS－ODN 12 OD／Kg组（f—6》 LAD结扎后， 4例发生短阵VT，但A卜2．0肚1．09。VT心律失常总数比NS，｝ODN及 scramNe－ODN预处理组明显减少（P＜0刀5）；但VP Bs，salvos之间无显著差异 O功刀5）；与＊巳00N 6 00瓜g预处理对照组相比，＊S明显降低，＊T明显缩短 0功．of入 ASDDN 18 OD／Kg组…书），LAD结扎后，仅 2例发生短阵 VT， AS二1．1710．41。AS，VPBs，salvos，VT，心律失常总数与正常灌流对照组相比， 2 第二军医大学 硕士学位论文 无显著差异（P＞0刀5）；与 NS，S0DN及 Scramble－ODN预处理对照组相比明显减 轻、减少o＜0乃5）；与 AS0DN 6 ODffeg预处理对照组相比，VPBS，心律失常总 数无显著差异（