Ric8蛋白等在寡孢节丛孢中的功能初步研究

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本论文以前期研究寡孢节丛孢RGS1转录组数据中表达量有显著差异的5个基因AOL_s00083gl27、AOL_s00007g178、AOL_s00080g412、AOL_s00076g18、 AOL_s00215g338 (Ric8)为研究对象,利用同源重组技术得到5个基因的敲除突变菌株,通过比较野生型菌株与敲除菌株在表型和生理生化特征上的差异来研究其在寡孢节丛孢中的所起到的作用。其中,Ric8蛋白是一个保守的鸟嘌呤交换因子,主要存在于动物和真菌中,在植物中还没有被报道。Ric8蛋白是G蛋白信号通路中的一个组成部分,通过正调控Ga亚基来控制下游的信号通路。Ric8蛋白在许多丝状真菌的生长发育中有着重要的作用,然而在捕食线虫真菌中的功能还未见报导。本文对寡孢节丛孢基因组中Ric8等5个基因的功能进行了一个初步的研究和探讨。主要研究结果:1. AOL_s00083gl27与AOL_s00007gl78为Gas1-like protein,它们含有功能未知的DUF3129结构域(IPR021476)。AOL_s00080g412含有两个Carbohydrate-binding WSC (PR002889)结构域。AOL_s00076g18蛋白含有202个氨基酸,通过Interproscan没有预测到保守的结构域。AOL_s00215g338蛋白含有Guanine nucleotide exchange factor(Ric8) (IPR019318)结构域。聚类分析表明,Gas1-like protein AOL_s00083g127和AOL_s00007g178在产生粘性捕食器官的寡孢节丛孢和坚粘孢单顶孢中有显著的扩增现象。2.通过酵母法和In-fusion法进行载体构建,得到了5个蛋白编码基因的阳性转化子。通过PCR以及Southern blot进行反复验证之后,分别选取其中的一个阳性转化子,进行表型和生理生化等方面的研究,来初步探究这五个基因在寡孢节丛孢生长发育中的功能。3.对敲除菌株进行表型以及生理生化等方面的比较,结果表明,Ric8蛋白参与了菌丝的生长与分化、产孢、捕器形成及抗逆性等途径的调控,其中对捕器形成、产孢数量以及抗逆性的影响最大。其余四个敲除菌株对生长速率和抗逆性的影响不大,但以上基因的敲除,导致菌株的产孢数量显著下降,同时捕食器官形成的数量和杀线虫能力也明显下降。本文的创新点:本研究构建了寡孢节丛孢中的Ric8等五个蛋白编码基因的敲除突变株,进一步的分析表明Ric8等五个蛋白对寡孢节丛孢的生长、产孢、抗逆性、产捕器和杀线虫的活性等有不同程度的影响。
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