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目的：通过研究桥本甲状腺炎(HT)患者外周血中Th17细胞及相关因子表达水平,分析Th17细胞与自身抗体变化的关系,了解Th17细胞及相关因子在HT发病中的作用；研究Th17细胞和Treg细胞在外周血中的比例及其特异性转录因子的表达水平,分析Th17/Treg细胞比率与自身抗体水平的关系,探讨HT患者Th17/Treg细胞免疫偏移与HT发生的相关性；研究HT患者外周血糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关配体(GITRL)表达水平,及其与Th17细胞和Treg细胞的相关性,探讨GITR/GITRL系统在Th17细胞和Treg细胞平衡中的作用；通过研究调控白介素-23受体(IL-23R)表达的的miRNAs,探讨了miR-125a-3p对HT患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-23R的调控作用,为HT的诊治提供新思路。方法：1、采用流式细胞术(FCM)检测HT患者与健康对照PBMC中CD3+CD8-IL-17+T细胞(即Th17)比例,ELISA检测HT患者与健康对照外周血血浆中IL-6、IL-23的水平,并进行比较。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HT患者与健康对照组PBMC中RORyt mRNA表达水平,逆转录PCR(RT-PCR)检测患者甲状腺组织中RORyt和IL-17mRNA的表达情况。2、应用化学发光免疫分析法(CIA)检测HT患者抗甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)的水平,分析患者PBMC中Th17细胞比例与自身抗体水平的相关性。3、采用流式细胞术检测HT患者与健康对照PBMC中CD4+CD25+CD127lowT细胞(即Treg)比例,通过qRT-PCR检测HT患者与健康对照PBMC中Foxp3mRNA表达水平。4、分析HT患者及健康对照PBMC中Th17/Treg细胞比率,并与TG-Ab水平进行相关性分析。5、采用ELISA检测HT患者和健康对照血浆中GITRL的水平,qRT-PCR检测HT患者甲状腺组织中GITRL mRNA的表达情况。分析血浆中GITRL水平与Th17和Treg细胞比例的相关性。6、免疫磁珠分选小鼠初始型CD4+T细胞,在Th17细胞诱导条件下进行体外培养,观察GITRL对促进小鼠Th17细胞分化的影响。7、采用qRT-PCR检测HT组与健康对照组PBMC中IL-23R mRNA的表达情况。以IL-23R为目的基因,利用targetscan/miRanda/Pictar数据库软件,预测可能调控IL-23R的miRNAs。8、通过qRT-PCR检测预测miRNAs在HT患者以及健康对照PBMC中的表达情况,筛选出符合预期的miRNA。9、利用荧光素酶报告基因检测实验验证miR-125a-3p与IL-23R的靶向作用,明确miR-125a-3p与IL-23R3’UTR结合位点的作用强度。将表达IL-23R的健康体检者PBMC作为靶细胞,转染miR-125a-3p mimics和NC,流式细胞术检测PBMCIL-23R表达变化。10、采用qRT-PCR方法检测HT患者和健康对照外周血PBMC miR-125a-3p的表达情况,并与IL-23R mRNA水平进行相关性分析。同时对HT患者PBMC中miR-125a-3p的表达水平与其自身抗体水平进行相关性分析。结果：1、与健康对照组相比,HT患者PBMC中的Th17细胞比例明显增高[(0.75+0.79)%vs(0.28+0.23)%,P<0.05]。HT组PBMC中Thl7细胞特异性转录因子RORγt的相对表达量显著高于健康对照组(0.30±0.38vs0.04±0.02,P<0.05)。HT患者血浆中IL-6、IL-23的表达量显著高于健康对照组(3.66±4.70vs0.47±1.11pg/ml, P<0.05)(154.7±75.81vs80.65±61.41pg/ml, P<0.05)。与单纯性甲状腺肿组相比,HT组患者甲状腺组织中表达RORyt和IL-17基因。2、桥本甲状腺炎患者PBMC中的Thl7细胞比例与其血清TG-Ab水平存在较强的正相关(r=0.8484,P=0.0077),与其血清TPO-Ab水平可能存在一定的正相关(r=0.6224,P=0.0994)。3、HT患者PBMC中Treg细胞比例明显降低(P<0.01)。Treg细胞特异性转录因子Foxp3mRNA的相对表达量也显著低于健康对照组(P<0.05)。4、HT患者外周血PBMCs中Th17/Treg细胞比率明显增高(P<0.01),并与TG-Ab呈现明显正相关(r=0.5243,P=0.0176)。5、HT患者外周血中GITRL的水平明显上调(P<0.05),相关分析显示,GITRL与Th17细胞比例呈明显正相关(r=0.5282,P=0.0167)。在Th17细胞诱导条件下,mGITRL可明显促进Th17细胞的诱导分化。6、与单纯性甲状腺肿组相比,HT组甲状腺组织中RORγt mRNA、IL-17mRNA和GITRL mRNA相对表达量明显增高(P均<0.05)。7、HT患者PBMC中IL-23R mRNA的表达水平显著上调(P<0.05)。以IL-23R为目的基因,经过软件分析,取预测结果的交集,结合文献查询结果,筛选出可能调控IL-23R的miRNAs:miR-155、miR-125a-3p。miR-125a-3p的表达显著下调(P<0.05),与上调的IL-23R mRNA表达水平趋势相反。8、荧光素酶报告基因检测实验证实,miR-125a-3p能够结合IL-23R的种子区,抑制下游IL-23R基因表达,降低荧光强度,结果表明,miR-125a-3p与IL-23R基因存在直接靶向关系。流式细胞术检测发现,与转染NC组相比,转染miR-125a-3p的PBMC表达IL-23R的细胞比例明显减少,提示miR-125a-3p可以抑制IL-23R的表达。9、qRT-PCR检测表明HT患者PBMC中miR-125a-3p相对表达量下调(P<0.05),相关性分析显示,miR-125a-3p表达水平与IL-23R mRNA表达水平呈负相关(r=-0.5195,P=0.0226)。miR-125a-3p表达水平与TG-Ab水平呈显著负相关(r=-0.4811,P=0.0371)。结论：1、HT患者体内Th17细胞及相关因子表达升高,Thl7细胞与自身抗体(TG-Ab)水平呈正相关,提示Th17细胞及相关细胞因子在HT的发生发展中起重要作用。2、HT患者外周血Th17细胞比例增加、Treg细胞比例减少,其特异性转录因子RORγt和Foxp3变化趋势与细胞比例相同,Th17/Treg细胞比率与TG-Ab水平呈显著相关,提示HT患者存在Th17/Treg失衡,为阐明HT的发病机制提供了新的思路。3、GITRL能够促进Th17细胞的产生,HT患者外周血血浆中GITRL高表达,与Th17细胞呈明显正相关。HT患者甲状腺组织中GITRL、RORγt、IL-17mRNA水平均高表达。结果表明,GITRL可能参与Th17/Treg细胞平衡的调节。4、miR-125a-3p可以直接调控IL-23R的表达。HT患者外周血PBMC中miR-125a-3p的表达显著下调,与IL-23R mRNA表达水平呈负相关,且与体内自身抗体水平呈负相关。提示miR-125a-3p与HT的发生及疾病严重程度有关。