蛋白A亲和层析是抗体药物分离的重要手段,对抗体吸附选择性高,但对杂质仍有一定程度的非特异性吸附,影响分离纯度、介质寿命及后续精制分离。本文针对蛋白A亲和层析介质的非特异性吸附,建立量化表征方法,考察多种介质和基质对不同料液中杂质和关键杂质的吸附情况,探讨相关吸附机制。首先,针对料液中杂质总量的非特异性吸附,建立了定量表征方法,优化了操作条件。以牛血清白蛋白、酵母细胞培养液和CHO细胞培养液作为典型杂质,考察了五种蛋白A亲和层析介质和三种基质微球的非特异性吸附。结果表明,介质和基质对杂质均有一定程度的非特异性吸附,吸附规律有差异,吸附机制也有所不同,可通过静电、疏水或两者共同作用结合杂质。相较于酸性条件,多数介质和基质在中性和偏碱性条件下的杂质吸附较低,吸附指数A在0～0.4范围内波动。三种基质材料在pH 6～9范围内的杂质吸附无显著差异。琼脂糖基介质的非特异性吸附主要来源其基质,而两款聚甲基丙烯酸酯基介质的杂质吸附比例高于其对应基质。其次,针对关键杂质——宿主细胞蛋白,以CHO细胞培养液为典型料液,考察了三组蛋白A亲和介质与其基质材料的非特异性吸附。结果表明,介质和基质均可结合较高比例的宿主细胞蛋白,特别是在酸性和中性条件。加盐可有效降低非特异性结合,但两种聚合物基介质在过高盐浓度下对宿主细胞蛋白的吸附反而上升。介质主要通过其基质结合宿主细胞蛋白,但pH 9时,rProA和PA介质的宿主蛋白结合比例高于其基质微球。宿主细胞蛋白鉴定结果表明,不同介质/基质结合的宿主细胞蛋白有所不同,在CHO细胞培养液中共鉴定得到600种宿主细胞蛋白,23种可同时被三组介质和基质所吸附,包含参与CHO细胞生命活动的胞内蛋白至少有12种,以及关键宿主细胞蛋白T-复合蛋白亚基等。本文系统考察了多种蛋白A亲和层析介质和基质材料的非特异性吸附,得到了一些规律性认识,并探讨了相关作用机制,所建立的定量和定性表征方法和结果可为新型蛋白A亲和层析介质的设计和研发提供指导。