论文部分内容阅读
随着世界经济的发展，人类生活水平的提高，人们在越来越多地关注食品对人的生命安全和身体健康的影响。在食品的污染因素中，真菌毒素对食品的污染是最严重的污染之一，而黄曲霉毒素因其对人、畜肝脏的剧烈损害而名列毒性之首。黄曲霉毒素(AFT)是一组真菌的次级代谢毒性产物。在天然污染的食品和饲料中以黄曲霉毒素B1(AFB1)最为常见，是黄曲霉菌产生毒素中的主要成分，其毒性和致癌性也最强，不仅给社会带来重大的经济损失，而且严重威胁消费者的健康。世界各国均制定了严格的AFT限量标准，且限量要求日益严格。我国目前还没有自主研制、适合现场检测的AFT检测试剂盒和免疫亲和柱，只有少数国家质量监督部门等机构使用极其昂贵的国外进口产品进行AFT抽样检测，根本无法有效地对食品、饲料生产的各个环节进行监控，造成AFT污染十分严重。为了解决该现状，迫切需要寻找一种经济、快捷、准确并且易于普及推广的AFT检测方法，进而能够有效地对食品的生产、运输、储存和销售进行监控，保障广大消费者的健康。
本研究采用杂交瘤技术，以黄曲霉毒素B1(AFB1)—牛血清白蛋白(BSA)复合物为免疫原免疫BALB/C小鼠，制备了4株稳定产生抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1D4，2A12，3B3，4A12，对其中的2A12细胞株分泌的抗体(以下简称2A12单抗)进行了综合鉴定。2A12单抗属IgG1，腹水效价1：5×105，亲和常数1.67×1010L/mol。黄曲霉毒素类似物B1，B2，G1，G2，M1与2A12单抗的相对交叉反应率分别为100％，52.5％，28.3％，20.0％，29.1％。表明该细胞株具广谱性，这一特点有利于作AFT总量的测定。
2A12单抗应用于三种黄曲霉毒素检测方法：1、免疫吸附法(ELISA)：检测限为0.5ug/kg，检测范围0.5～50ug/kg。ELISA是常规检测方法，通量较高，但不宜野外现场测定。
2、免疫亲和层析—荧光光度计法(IAC-SFB)：检测限低于1ug/kg，测量范围1～300ug/kg。IAC-SFB以免疫亲和柱高效净化样品，真菌毒素荧光光度计直接报告测定结果，速度快，操作简易、安全，且可发展为野外现场测定技术。
3、免疫亲和层析—高效液相色谱法(IAC-HPLC)：检测限低于1ug/kg，测量范围1～300ug/kg。IAC-HPLC法同样以免疫亲和柱高效纯化(净化)样品，高效液相色谱仪检测分析。此方法既可对AFT各亚类单独定量，亦可进行AFT总量测定，常用于确证分析。
以上三种方法的回收率均在70％以上，变异系数1.2％到9.4％之间，符合我国有关的商品检验行业标准，完全满足AFT检测的需要，可实现推广应用。