【摘 要】
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研究目的过敏性哮喘是以Th2反应为主的嗜酸性粒细胞性疾病。Dectin-2（由Clen4n基因编码）是一种C型凝集素受体,能与屋尘螨（HDM）等过敏原相互作用诱导过敏性哮喘,但具体作用机制不明。本研究旨在利用HDM构建气道过敏性哮喘疾病模型,探讨Dectin-2在HDM诱导的过敏性哮喘中的作用机制,以期为临床哮喘的治疗寻求新的出路。研究方法应用HDM滴鼻构建小鼠哮喘模型。利用HE染色、ELISA、
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研究目的过敏性哮喘是以Th2反应为主的嗜酸性粒细胞性疾病。Dectin-2（由Clen4n基因编码）是一种C型凝集素受体,能与屋尘螨（HDM）等过敏原相互作用诱导过敏性哮喘,但具体作用机制不明。本研究旨在利用HDM构建气道过敏性哮喘疾病模型,探讨Dectin-2在HDM诱导的过敏性哮喘中的作用机制,以期为临床哮喘的治疗寻求新的出路。研究方法应用HDM滴鼻构建小鼠哮喘模型。利用HE染色、ELISA、流式细胞分析、定量PCR、蛋白免疫印迹等多个手段,检测肺组织炎症细胞浸润,血清总IgE和HDM特异性的IgE产量,肺泡灌洗液（BALF）中Th1/Th2/Th17细胞因子、IL-33、TSLP等多种细胞因子及趋化因子的产生水平;计数肺组织、纵隔淋巴结、BALF中的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞,树突状细胞（DCs）、CD4+T细胞数量及比例。气管内过继回输哮喘模型完成后野生型（WT）和Dectin-2缺陷型小鼠(Clec4n-/-)来源的cDC2s,进一步验证Dectin-2通过调节DCs的活化,促进哮喘发生发展。最后,通过体外培养骨髓源性树突状细胞,利用流式细胞分析、定量PCR、蛋白免疫印迹等实验观察Dectin-2对DCs表面共刺激分子表达、抗原递呈功能,以及信号通路的影响。研究结果应用HDM成功诱导小鼠过敏性哮喘的疾病模型。HDM刺激后,肺部树突状细胞表达Clec4n明显增加。Dectin-2缺陷型小鼠(Clec4n-/-)肺部嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润较WT小鼠明显降低,均具有统计学意义。检测小鼠肺部细胞因子及趋化因子/受体表达水平,发现Clec4n-/-疾病组BALF中Th2相关细胞因子较WT模型组明显降低,且IL-33、TSLP以及树突状细胞募集相关趋化因子CCL等细胞因子明显降低。说明Dectin-2可能通过促进Th2反应以及DCs募集加重过敏性哮喘。重要的是,Clec4n-/-小鼠在HDM诱导的致敏和激发的阶段下,肺内cDCs数量较WT小鼠均明显降低,并且以cDC2s降低为主。说明Dectin-2可能通过促进肺部cDC2s募集加重过敏性哮喘。气管内分别给予HDM激发后的WT-cDC2s和Clec4n-/--cDC2s致敏WT小鼠,再利用HDM连续激发,发现给予Clec4n-/--cDC2s组小鼠肺泡灌洗液中的炎症细胞浸润明显低于给予WT-cDC2s组小鼠,证实Dectin-2可通过激活肺内的cDC2s诱导过敏性哮喘。体外实验结果显示,HDM刺激后,骨髓源性Clec4n-/-DCs表达共刺激分子以及刺激T细胞增殖明显低于WT-DCs,说明Dectin-2影响DCs的活化以及抗原递呈能力。HDM刺激后,Clec4n-/-DCs表达IL-33水平较WT-DCs明显降低,且Clec4n-/--DCs表达IL-33受体（ST2）明显低于WT-DCs,提示IL-33/ST2在Dectin-2影响DCs活化过程中具有重要作用。重要的是,WT-DCs经抗IL-33抗体预处理后,HDM刺激DCs表达共刺激分子CD80、CD40明显降低,而加入重组IL-33预处理后,Clec4n-/--DCs表达CD80、CD40明显增加。进一步说明Dectin-2可能通过影响IL-33/ST2促进DCs活化。信号通路探讨发现,HDM刺激后,Clec4n-/--DCs的Syk、P65、IKKα/β、JNK、P38磷酸化水平明显低于WT-DCs,提示Dectin-2可能通过Syk、NF-k B和MAPK通路促进HDM诱导骨髓DCs的活化。研究结论Dectin-2通过促进cDC2s活化与成熟加重HDM诱导的过敏性哮喘。
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