胎儿生长受限(Fetalgrowthrestriction，FGR)或称胎儿生长迟缓(intrauterinegrowthretardation，IUGR)是指孕37周后，胎儿出生体重小于2500g；或低于同孕龄平均体重的两个标准差；或低于同孕龄正常体重的第10百分位数。FGR是产科重要的并发症之一，我国的平均发病率为6.39％。FGR围生儿死亡率为正常胎儿的4～6倍，导致FGR围生儿死亡的最主要原因是肺发育不全及其并发症，如呼吸窘迫综合征(respiratorydistresssyndrome，RDS)、新生儿窒息、酸中毒等。而FGR围生儿诸多急慢性肺部疾患的高发病率主要与肺脏器官发育不成熟、表面活性物质合成分泌不足有关。 近期研究发现，瘦素(Leptin，Lep)与妊娠、胎儿的生长发育及产后哺乳等有密切关系。瘦素及其受体广泛存在于胎儿的脑、肝、肾等多数组织器官，特别是其表达于多种动物的胎肺组织，并在胎肺发育的关键期即小管期、囊性期表达量剧增，这提示瘦素及其受体可能参与表面活性物质的合成和胎肺成熟过程。 瘦素通过其特异性受体——瘦素受体(Leptinreceptor，Lep-R)发挥广泛的生物学作用，主要包括降低食欲、减少摄食、减轻体重等中枢作用，及增加能量消耗，促进生殖、造血、免疫功能，促进组织器官发育等外周作用。尽管具体作用机制尚不明了，但大量临床资料证实，脐血的瘦素水平与胎儿体重呈正相关，FGR胎儿脐血瘦素水平低于正常胎儿。在FGR过程中，持续的宫内缺血缺氧造成宫内血氧、营养物质等缺乏，胎儿组织器官发育的能源不足，胎儿体重减轻、体脂减少，瘦素的产生相应减少，但瘦素水平的不足又延缓了组织器官的发育，最终可能导致FGR胎儿组织器官发育不良、肺脏发育不成熟、表面活性物质分泌不足。尽管不少研究认为瘦素及其受体与胎肺发育关系密切，但FGR胎儿的瘦素及其受体表达水平与FGR胎肺发育不良的关系，目前国内尚未见报道，仍有待阐明。 一、研究目的1、观察正常仔鼠与FGR仔鼠不同阶段肺发育组织形态学特点。 2、研究瘦素及其受体在正常仔鼠与FGR仔鼠各期胎肺组织中的分布、定位及半定量表达。 3、探讨瘦素及其受体与正常仔鼠与FGR仔鼠各期胎肺发育的关系。 二、材料及方法1、建立FGR动物模型：采用子宫动静脉缩窄法。选取Sprague-Dawley(SD)大鼠，其平均孕期为21天。将孕鼠随机分为六组：FGR组F17、F19、F21组于妊娠第16天行子宫动静脉缩窄术，分别于孕17、19、21天剖宫取胎。正常对照组N17、N19、N21于妊娠第16天行腹腔麻醉、开腹、关腹手术，分别于孕17、19、21天剖宫取胎。测量仔鼠体重、身长、肺重量、胎盘重量及仔鼠呼吸评分。 2、各发育阶段仔鼠肺组织HE染色，测量肺泡腔或肺管腔面积比、肺间隔面积比，进行组织学评分，观察评价肺发育阶段及上皮细胞发育状况。 3、各发育阶段仔鼠肺组织免疫组织化学SABC法检测瘦素及其受体的分布、定位及半定量表达。 三、结果1、子宫动静脉缩窄术后，FGR组中F17组的死胎与吸收胎率为3.53％，相比正常对照组中N17的2.27％，差别无统计学意义(P＞0.05)。FGR组F19、F21组的死胎与吸收胎率分别为20.27％、32.89％，正常对照组N19、N21组的则为2.34％、4.26％，差别有统计学意义(P＜0.01)。 F17组仔鼠平均体重为1.93±0.25g，平均身长为2.40±0.53cm，平均肺重为0.0601±0.01414g，平均胎盘重量为0.32±0.10g；N17组仔鼠平均体重为2.11±0.17g，身长为2.55±0.16cm，平均肺重为0.0667±0.01155g，平均胎盘重量为0.33±0.04g；差别均无统计学意义(P＞0.05)。 FGR组中F19组与F21组仔鼠平均体重分别为3.16±0.63g、4.71±0.69g；平均身长分别为3.20±0.34cm、3.96±0.24cm；平均肺重分别为0.0873±0.01489g、0.1415±0.02028g，平均胎盘重量分别为0.45±0.11g、0.45±0.11g；正常对照组中N19组与N21组仔鼠平均体重分别为3.83±0.31g、5.79±0.47g；平均身长分别为3.52±0.21cm、4.31±0.12cm；平均肺重分别为0.1040±0.01350g、0.1610±0.01663g；平均胎盘重量分别为0.61±0.05g、0.74±0.08g，差别均有统计学意义(P＜0.05)。 以正常同孕龄胎鼠的平均体重减去两个标准差作为FGR的判断标准，故按5.79-0.47×2=4.85(g)为妊娠21天FGR判断标准；按3.21g为妊娠19天FGR判断标准；按1.77g为妊娠17天FGR判断标准。 FGR各组F17、F19、F21组的FGR发生率分别为7.32％、69.49％、58.82％，与正常对照组N17、N19、N21组的2.33％、2.38％、4.44％相比，差别均有统计学意义(P＜0.01)。 2、FGR各组F17、F19、F21组的仔鼠呼吸评分分别为1.08±0.29、2.13±0.41、4.27±0.72，显著低于对照组的1.31±0.48、2.66±0.39、4.90±0.29(P＜0.05)。FGR各组仔鼠组织学评分分别为1.10±0.27、2.17±0.38、4.21±0.35，亦均低于正常对照组N17、N19、N21组的1.34±0.45、2.79±0.42、4.76±0.22，差别均有统计学意义(P＜0.05)。 3、FGR各组F17、F19、F21组的FGR仔鼠肺泡腔或肺管腔面积比分别为8.80±1.44％、20.69±4.61％、44.73±2.80％；对照组N17、N19、N21组分别为19.44±3.35％、34.84±3.43％、47.40±8.41％，差别均有统计学意义(P＜0.05)。FGR各组F17、F19、F21组的肺间隔面积比分别为91.26±1.50％、79.40±3.76％、55.47±3.14％，正常对照组N17、N19、N21组分别为77.35±2.94％、65.15±2.13％、52.62±8.40％；差别均有统计学意义(P＜0.05)。FGR组胎肺肺间膈明显增厚，肺泡腔或肺管腔面积减小，囊性化、肺泡化比率较低，Ⅱ型上皮细胞出现延迟，呈现相对发育延迟状态。 4、瘦素及其受体的分布与表达：瘦素主要定位于肺上皮细胞、支气管粘膜腺体细胞的胞浆、核膜，在血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、软骨细胞胞浆、核膜内少量分布；瘦素受体主要定位于Ⅱ型肺上皮细胞、支气管粘膜腺体细胞胞质内。FGR仔鼠瘦素及其受体表达强度低于对照组(P＜0.05)。FGR组与对照组的瘦素及瘦素受体的表达强度均呈正相关(r=0.81，0.84；P＜0.01)。F21与N21组雌、雄仔鼠的瘦素及瘦素受体的表达强度无明显差异(P＞0.05)。 5、瘦素及其受体表达强度分别与新生胎鼠体重、肺重、呼吸评分、组织学评分、肺泡腔或肺管腔面积比均呈正相关(r=0.90，0.87，0.74，0.83，0.85及r=0.93，0.92，0.81，0.85，0.86；P＜0.01)，与肺间隔面积比呈负相关(r=-0.79及r=-0.74；P＜0.01)。 四、结论1、本研究运用子宫动静脉缩窄法成功制作了子宫胎盘缺血FGR模型。 2、本研究结果提示相对于正常对照组，FGR组胎肺肺泡膈明显增厚，肺泡腔或肺管腔面积减小，囊性化、肺泡化比率较低，Ⅱ型上皮细胞出现延迟，呈现相对发育延迟状态。 3、本研究结果提示正常组大鼠孕17、19、21天及FGR组孕19、21天胎肺组织均有瘦素及其受体的表达，随孕期的进展有不断增高趋势，瘦素及其受体可能与胎肺发育过程密切相关。 4、本研究结果显示各期FGR组大鼠胎肺发育相对延迟、肺功能下降，肺组织内瘦素及其受体水平较低，故FGR仔鼠胎肺发育不良可能与肺组织内瘦素其受体水平不足有关。 5、本研究结果提示肺脏瘦素受体的出现时间晚于瘦素。 6、本研究结果显示肺脏瘦素及其受体的分布表达强度无明显性别差异。