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致龋菌的致龋性除与其对牙面的粘附能力和产酸性有关外,还与其耐酸性密切关。耐酸性是细菌在低pH环境下继续产酸并行使功能的能力,被认为是致龋菌在牙的生物膜上生存的一个重要决定因素。目前耐酸相关基因ffh受到国内外学者的密切关注,该基因编码产物为一生物活性蛋白,是真核细胞中参与蛋白质易位的信号识别颗粒54kDa亚单位同系物。国外学者研究发现,在变形链球菌突变株AS17中,ffh突变并没有使细胞失去活力,但却严重影响细胞对酸的耐受性。pH5.0冲击下的AS17细胞膜的H+/ATP酶活性与pH7.5的H+/ATP酶活性相当,但其活性比野生型在pH5.0冲击下的H+/ATP酶活性低2倍。这是因为缺失Ffh使其膜不能重排以产生酸耐受反应的方式,也包括不能合并多余的H+/ATP酶多肽。同样,AS17不能发酵山梨糖醇,尽管其能在葡萄糖和许多其他蔗糖底物中生长。这些发现说明Ffh可能在变链菌适应变化的环境中,与维持细胞功能性膜蛋白质组成有关。在本项研究中,我们采用引物设计原则,根据GenBank上发表的各种属ffh基因序列,从最保守区设计一对PCR引物,钓取基因,进行PCR,发现在干酪乳杆菌、远缘链球菌、血链<WP=42>球菌的基因组为模板的聚合酶链反应中,所获得的特异性片段与预期结果一致。我们将干酪乳杆菌中PCR产物克隆入TA载体后,经蓝白筛选,挑取白色菌落进行酶切鉴定,其中一个克隆含有一700bp左右片段,将该克隆进行DNA测序,应用BLAST网络服务对测得的序列在GenBank数据库中进行同源性比较,结果显示在核苷酸水平同源性低,为一段新序列,但BLASTX比对有较高的同源性,同源性最高为71%,TBLASTX比对最高为73%。结果呈送美国GenBank,登陆序列号为AY389024。本实验测得的序列只是部分序列,关于干酪乳杆菌中耐酸相关基因ffh的开放阅读框架将进一步研究。远缘链球菌、血链球菌也已获得与预期结果一致的特异性产物,但由于时间有限,未进行测序,有待进一步研究。总之,耐酸相关基因ffh的研究目前已经成为国内外学者的关注热点,该研究方向提出了一种新的对龋病预防的概念,对构建防龋疫苗的合适抗原而进行主动免疫将具有重要意义。