黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）属于植物帚状病毒科（Virgaviridae）烟草花叶病毒属（Tobamovirus），主要通过种子传播。近年来， CGMMV在世界葫芦科作物上频繁发生，给生产造成严重的经济损失。本研究首先制备了CGMMV衣壳蛋白抗血清；随后构建了CGMMV侵染性cDNA克隆，筛选到两个弱毒突变体并测定了其交叉保护效果；进而筛选到与 CGMMV 衣壳蛋白互作的本氏烟蛋白酶抑制因子NbPI，并通过病毒诱导的基因沉默（Virus-induced gene silencing，VIGS）分析其在病毒侵染过程中的作用。具体结果如下：　　（1）利用原核表达的CP制备了CGMMV抗体。获得的抗血清能与CGMMV CP发生特异性免疫反应，与同属的烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）无反应。琼脂双扩散试验测定抗血清的效价为1∶16，ELISA测定血清效价为1∶1024。　　（2）基于CGMMV潍坊分离物构建了可以侵染西瓜的 CGMMV 侵染性克隆。我们分两段扩增病毒全基因组，同时把一个西瓜内含子插在病毒RdRp编码区内，随后将全长连入携带35S启动子的pCambia0390 载体上获得重组质粒pCGMMV-WF。将克隆通过农杆菌浸润西瓜后，西瓜系统叶片表现的发病症状与病毒积累量水平与野生型CGMMV一致，侵染效率达到100%。　　（3）实验室曾构建CGMMV济南分离物侵染性克隆，可侵染本氏烟。通过比对氨基酸序列，发现CGMMV CP第89位、114位氨基酸和RdRp第68位、869位和1069位的五个氨基酸高度保守。我们将侵染性克隆中这些氨基酸都突变为丙氨酸，得到突变体命CGMMV-CP-D89A、CGMMV-CP-R114A、CGMMV-RdRp-E68A、CGMMV-RdRp-K869A和 CGMMV-RdRp-E1069A。将这些突变体分别接种本氏烟，发现突变体 CGMMV-CP-D89A与CGMMV-RdRp-E1069A在本氏烟上的致病力显著降低，说明CGMMV CP第89位的天冬氨酸与RdRp第1069位的谷氨酸是决定病毒致病力的关键氨基酸位点。随后将这些弱毒突变体在本氏烟上进行交叉保护实验，结果表明突变体CGMMV-CP-D89A与CGMMV-RdRp-E1069A的保护效率分别为91.7%和100%，在本氏烟上可以有效阻止强毒的侵染。根据本氏烟上的实验结果，我们将可以侵染西瓜的侵染性克隆CGMMV-WF进行改造，获得突变体CGMMV-WF-CP-D89A和CGMMV-WF-RdRp-E1069A。这些突变体在西瓜上的交叉保护实验结果表明，突变体 CGMMV-WF-CP-D89A 不能对西瓜进行有效的保护，其保护效率仅为11.1%；而突变体CGMMV-WF-RdRp-E1069A则能够对西瓜进行有效的保护，保护效率高达100%。　　（4）通过Pull down实验发现CGMMV衣壳蛋白（Coat protein，CP）能够与本氏烟蛋白酶抑制因子（NbPI）发生相互作用，随后发现TVBMV的CP也可以与同一种蛋白酶抑制因子发生相互作用。在用酵母双杂交（Yeast two-hybrid system，YTHS）和双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation，BiFC）等方法验证互作关系后，我们通过VIGS沉默NbPI基因，将基因沉默的烟草接种CGMMV（或TVBMV）后，我们发现烟草的发病症状更加严重，病毒复制水平也显著提升。这说明NbPI是植物中的一个抗病毒靶标，推测它是通过绑定病毒CP来影响病毒的复制水平。