基于HPV L1的食管癌疫苗的构建及免疫效果的初步研究

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人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)是一种广泛存在的嗜上皮性病毒,能引起多种疾病。高危型HPV与多种鳞状及腺上皮恶性肿瘤(包括宫颈癌、食管癌、喉癌等)有关,我国为食管癌高发国家,全世界每年新确诊的40多万食管癌患者中,一半以上发生在中国。研究表明,食管癌的发生是多因素协同作用的结果,其中HPV16和18型是中国人食管癌发生的重要致病因素。已上市的宫颈癌HPV疫苗为蛋白质疫苗,仅能诱发机体产生特异性中和抗体,只能起到预防病毒感染的作用,不能作为治疗性疫苗清除已经感染病毒的细胞和癌细胞。目前,国际上还没有针对食管癌的预防性及治疗性疫苗研究,由于在食管癌组织和食管癌细胞株中检测到了衣壳蛋白L1的表达,因而可以以此开发基于HPV L1的食管癌疫苗。本课题构建了含有HPV16L1和HPV18L1基因的重组DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,然后使用制备的疫苗分别免疫小鼠,在最后一次免疫一周后,通过假病毒中和滴定实验检测了疫苗的体液免疫效果,并使用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测了疫苗的细胞免疫效果。结果发现:(1)HPV16L1和HPV18L1疫苗都可以诱导产生较高的体液免疫反应。加强免疫时注射108vp腺病毒疫苗的免疫组血清中和滴度达到320以上,注射109vp或1010vp腺病毒疫苗的免疫组血清中和滴度达到640以上。(2)HPV16L1的重组DNA疫苗和腺病毒疫苗确定可以诱导产生强烈的HPV16L1特异性的细胞免疫反应;HPV18L1的重组DNA疫苗和腺病毒疫苗可能由于T细胞表位肽预测不正确因而检测到的细胞免疫反应较弱。(3)HPV16L1139-147(AGVDNRECI)为HPV16L1的H-2Db限制性T细胞表位,HPV16L1355-364(YKNTNFKEYL)可能是HPV16L1的一个较弱的H-2Db限制性T细胞表位。HPV18L1的T细胞表位还有待进一步的筛选。
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