三七达玛烷萜牙膏辅助治疗大鼠牙周炎的研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongtu200909
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三七是五加科(Aralianceae)多年生草本植物人参三七(Panax notoginseng(Burk) F.H.Chen)的干燥根,具有止血作用,可以减少肿胀和疼痛,同时具有散瘀和促进血液循环的作用。目前,多数的研究者认为三七总皂苷是三七发挥功效的主要物质,还有研究者报道皂苷在化学结构上,C-4位有羟甲基C-17位有羧基的,它的达玛烷萜部分是具有抗炎效果的主要因素。牙周炎(periodontitis)严重威胁人类身体健康。微生物感染是牙周炎形成的关键因素,局部因素是诱发和促进牙周炎的重要因素。牙周炎治疗需要长期进行,预防是关键。因此,本研究旨在提取分离出三七皂苷的活性部位——三七达玛烷萜(Dammarane terpenes of Panax notoginseng,PNDT),将其添加到牙膏中制得三七达玛烷萜牙膏,并对其缓解牙周炎的功效进行评价,以丰富功效型牙膏市场。  第一章综述了目前市场上的功效型牙膏中添加的中草药天然活性成分的研究与应用。  第二章采用乙醇浸渍,溶剂萃取,强酸水解,大孔树脂吸附从三七根/根茎中提取到三七达玛烷萜。该提取物通过核磁共振的碳谱和氢谱,其碳谱主要集中在0-80 ppm,共27个碳信号,氢谱主要分布在0-4.5 ppm,主要集中在1.3-2.0之间。分离的化合物和人参三醇的数据相对照后,确定分离得到的化合物是人参三醇。该化合物无特征紫外吸收,能溶于石油醚,乙醚,氯仿等有机溶剂不溶于水。该化合物无特征紫外吸收,能溶于石油醚,乙醚,氯仿等有机溶剂不溶于水。人参三醇能用薄层层析检测纯度,以氯仿:甲醇=10:1为展开剂,10%的硫酸的乙醇溶液喷涂加热后显色,提取物通过薄层层析法在Rf=0.76处有明显色斑。  第三章对于提取得到的三七达玛烷萜的抑菌作用和抗炎作用进行了初步的探讨。三七达玛烷萜抑制口腔致病菌变异链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的MIC分别为12.5mg/ml、6.5mg/ml、6.5mg/ml。剂量为100 mg/kg、50 mg/kg和10 mg/kg的三七达玛烷萜灌胃处理一周后,二甲苯诱导的小鼠足趾的肿胀抑制率分别达到60%、50%和18%,高剂量处理效果超过剂量15mg/kg阿司匹林的阳性处理效果。三七达玛烷萜的抑菌作用和对小鼠足趾肿胀的抑制作用暗示着三七达玛烷萜通过抗菌和消炎在辅助治疗牙周炎上的良好作用。  第四章采用响应面法对三七达玛烷萜牙膏的配方进行优化,该方法可以充分考虑到三七达玛烷萜添加量、增稠剂的添加量和保湿剂:摩擦剂的量这三个因素之间的交互作用,采用非线性模型拟合,决定系数较高,可信度较好,预测值与实际值接近。验证试验结果与模型符合良好,表明响应面法可以对三七达玛烷萜牙膏的配方确定进行较好的分析和确定。优化的配方为三七达玛烷萜添加量为0.12%,增稠剂的添加量为1.58%(羧甲基纤维素钠1.1%,卡拉胶0.48%),保湿剂:摩擦剂为1.01(甘油13%,山梨醇27%,碳酸钙36%,二氧化硅40%),十二烷基硫酸钠2%,苯甲酸钠0.15%,糖精钠0.1%,香精1%,去离子水余量。  第五章采用柱前衍生-反相高效液相色谱法对三七达玛烷萜及其牙膏中功效成分人参三醇的含量进行测定。苯甲酰氯为柱前衍生化试剂,流动相流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸(30+70)混合溶液,在此条件下,样品与对照品在32min时有特征吸收峰,通过日内日间精密度与准确度的测定,证明采用该方法重现性良好,可以准确的测定三七达玛烷萜和三七达玛烷萜中功效成分人参三醇的含量。实验室提取的三七达玛烷萜中人参三醇的含量为39.31%,三七达玛烷萜牙膏中人参三醇的含量为0.039%。  第六章用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)作为诱导菌,用医用5-0丝线结扎大鼠上颌第二磨牙,再每天用10%蔗糖水供SD大鼠饮用,诱发SD大鼠急性牙周炎以建立SD大鼠牙周炎动物模型。经过8周处理,从外观指标和牙组织形态学显示牙周炎SD大鼠模型的形成。用高低浓度的三七达玛烷萜和三七达玛烷萜牙膏处理作为实验组大鼠牙龈4周,以不含有三七达玛烷萜的普通牙膏和只用生理盐水处理的作为空白组,以辅助治疗牙周炎的云南白药牙膏为阳性对照,从牙龈指数、菌斑指数、探诊出血、IL-6含量、TNF-α含量和组织形态学切片等指标对三七达玛烷萜牙膏对SD大鼠牙周炎的缓解作用进行评价。结果表明:在给药2周后,与空白组相比,实验组大鼠探诊出血情况消失,血液中 TNF-α的含量也较空白组的含量有显著降低;给药3周后,实验组大鼠牙龈红肿情况好转,牙龈指数降低,菌斑指数降低,血液中IL-6的含量显著降低;给药4周后,可以明显的从组织形态学切片图中看到实验组大鼠牙周膜纤维排列整齐,成牙骨质细胞排列整齐,牙槽嵴无吸收,牙槽骨无破坏。
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