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禽流感(avain influenza, AI)是一种在世界范围内流传的禽类传染病,致死率极高、传染性极强且可跨物种传播,严重影响家禽业及其它养殖业的发展以及人类健康。禽流感病毒(avian influenza virus,AVI)属于甲型流感病毒,H5N1病毒属甲型流感病毒亚型,多发于禽类,是一种高致病性病毒,可导致人类及多种动物患病。血球凝集素(hemagglutinin, HA)是禽流感病毒表面的一种抗原物质,负责病毒与宿主受体的结合。 抗体(antibody, Ab)是由B细胞接受抗原刺激后增殖分化形成的浆细胞(效应B细胞)所产生的糖蛋白,主要存在于血清等体液中,是介导体液免疫的重要效应分子,能与抗原特异性结合后发挥免疫功能。利用抗体与抗原结合的特异性,抗体已经广泛应用于病毒、细菌以及外源蛋白的检测,且可作为诊断及治疗人和动物的某些疾病的试剂或药物。抗体分为天然抗体、单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)、多克隆抗体(polyclonal antibody)与基因工程抗体。其中,单克隆抗体与多克隆抗体的应用较为广泛。单克隆抗体的特异性高,但制备程序繁琐、实验周期长、价格较高。多克隆抗体制备多是通过原核蛋白的皮下注射或静脉注射进行动物免疫,进而实现抗体制备,但其抗体效价在真核细胞中的应用还有待提高。一般来讲,多克隆抗体制备所用的免疫动物主要为哺乳动物与禽类,需根据抗体的用途、需求量等实际需求进行选择。 酵母作为一种食用微生物,具有安全性高、有较强的免疫佐剂效应、对肠胃的分泌物抵抗能力较强等优点,研究报道酵母可以将重组蛋白呈递至动物体内引起免疫反应。本实验室首次证明酵母可以呈递DNA片段到小鼠肠道树突状细胞(Dendriticcells, DCs),引起小鼠相关免疫反应;并在之后证明酵母可以呈递外源DNA到鱼、家兔等动物体内。因此,我们选用酵母作为本实验的抗原呈递载体,实现抗体的快速制备。 在本研究中,我们设计了一种能够表达禽流感H5N1病毒HA抗原基因的重组酵母,通过口服饲喂的方式呈递至BALB/c小鼠体内,实现H5N1抗体的快速制备。首先,构建含有H5N1 病毒 HA 抗原基因的真核表达载体 JMB84-CMV-HA;然后,将JMB84-CMV-HA载体转化到酿酒酵母JMY1中,通过口服方式将HA基因呈递到小鼠肠道DCs细胞;免疫28天后,通过Western Blotting检测到小鼠血清中产生HA蛋白抗体。该研究为今后禽流感病毒抗体的快速制备研究提供新的思路。