禽流感病毒H5N1抗体的快速制备研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaiwenru
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
禽流感(avain influenza, AI)是一种在世界范围内流传的禽类传染病,致死率极高、传染性极强且可跨物种传播,严重影响家禽业及其它养殖业的发展以及人类健康。禽流感病毒(avian influenza virus,AVI)属于甲型流感病毒,H5N1病毒属甲型流感病毒亚型,多发于禽类,是一种高致病性病毒,可导致人类及多种动物患病。血球凝集素(hemagglutinin, HA)是禽流感病毒表面的一种抗原物质,负责病毒与宿主受体的结合。  抗体(antibody, Ab)是由B细胞接受抗原刺激后增殖分化形成的浆细胞(效应B细胞)所产生的糖蛋白,主要存在于血清等体液中,是介导体液免疫的重要效应分子,能与抗原特异性结合后发挥免疫功能。利用抗体与抗原结合的特异性,抗体已经广泛应用于病毒、细菌以及外源蛋白的检测,且可作为诊断及治疗人和动物的某些疾病的试剂或药物。抗体分为天然抗体、单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)、多克隆抗体(polyclonal antibody)与基因工程抗体。其中,单克隆抗体与多克隆抗体的应用较为广泛。单克隆抗体的特异性高,但制备程序繁琐、实验周期长、价格较高。多克隆抗体制备多是通过原核蛋白的皮下注射或静脉注射进行动物免疫,进而实现抗体制备,但其抗体效价在真核细胞中的应用还有待提高。一般来讲,多克隆抗体制备所用的免疫动物主要为哺乳动物与禽类,需根据抗体的用途、需求量等实际需求进行选择。  酵母作为一种食用微生物,具有安全性高、有较强的免疫佐剂效应、对肠胃的分泌物抵抗能力较强等优点,研究报道酵母可以将重组蛋白呈递至动物体内引起免疫反应。本实验室首次证明酵母可以呈递DNA片段到小鼠肠道树突状细胞(Dendriticcells, DCs),引起小鼠相关免疫反应;并在之后证明酵母可以呈递外源DNA到鱼、家兔等动物体内。因此,我们选用酵母作为本实验的抗原呈递载体,实现抗体的快速制备。  在本研究中,我们设计了一种能够表达禽流感H5N1病毒HA抗原基因的重组酵母,通过口服饲喂的方式呈递至BALB/c小鼠体内,实现H5N1抗体的快速制备。首先,构建含有H5N1 病毒 HA 抗原基因的真核表达载体 JMB84-CMV-HA;然后,将JMB84-CMV-HA载体转化到酿酒酵母JMY1中,通过口服方式将HA基因呈递到小鼠肠道DCs细胞;免疫28天后,通过Western Blotting检测到小鼠血清中产生HA蛋白抗体。该研究为今后禽流感病毒抗体的快速制备研究提供新的思路。
其他文献
本论文通过三个试验,研究了利用人工瘤胃产气法、SAS分析软件和对数数学模型来估测饲料中碳水化合物组分含量及其瘤胃降解速度,以及利用近红外光谱法预测青贮玉米饲料中各种营
本研究以人生长激素基因和人激肽释放酶基因作为目的基因,利用胚盘显微注射法和精子介导外源基因转移法制备转基因鸡,其结果如下: 1.胚盘显微注射法关键技术之一是蛋壳恢复共
本论文由四个试验组成,试验一研究了挤奶前后奶牛后乳区皮肤温度的变化规律及其影响因素,确定了采集奶牛乳区红外热图像的适合时间点;试验二研究了奶牛乳区皮肤温度的日变化
本试验旨在研究霉变饲粮中镰刀菌毒素对断奶仔猪血清代谢、氧化应激、血液学以及生殖器官的影响。通过饲养试验,对血清代谢产物、氧化应激、血液学、阴户面积、生殖器官指数
本试验通过蚕沙常规营养成分、代谢能、常规营养物质(包括氨基酸)利用率的分析,系统的评定了蚕沙的营养价值,同时通过14-70日龄仔鹅饲养试验,初步探讨确定了仔鹅饲粮中蚕沙的
对绵羊卵母细胞孤雌激活与冷冻保存进行研究,找出适合绵羊卵母细胞冷冻的方法及程序,为体外受精、核移植和转基因动物的研究与应用提供卵母细胞来源。试验研究了卵母细胞体外
本论文通过六个试验比较研究了产蛋高峰期公母鸡氮维持需要及氮代谢规律,内源氮及内源氨基酸排泄量及排泄规律、公母鸡可利用Lys、Met、Thr和Trp维持需要量及模式,对公母鸡内源