18F-FDG micro PET/CT在大鼠脑缺血再灌注损伤模型筛选及三七总皂苷疗效评价的应用

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第一部分18F-FDG micro PET/CT在脑缺血再灌注模型筛选中的应用目的:以病理作为金标准,探讨18F-FDG micro PET/CT显像筛选脑缺血再灌注模型(MCAO/R)的可行性。方法:随机选取18只雄性SD大鼠并编号,采用改良的Zea-Longa线栓法制作MCAO/R模型。术后清醒时Zea-Longa评分为1-4分视为入选标准。术后2h及24h,采取Garcia 18分法进行大鼠神经功能评分。建模后2h、24h两个时间点麻醉大鼠,经尾静脉注射18F-FDG 40min后,行micro PET/CT扫描,对图像进行视觉分析及半定量分析。对发生意外死亡大鼠,进行尸体解剖及脑HE染色;术后24h存活大鼠扫描结束后,迅速断头取脑,TTC染色法评价脑梗死部位、梗死率。结果:18只入选大鼠病理结果为:11只为MCAO/R模型,4只为蛛网膜下腔出血,3只为蛛网膜下腔出血伴脑出血。术后8-12h,4只大鼠意外死亡。术后2h神经功能评分及micro PET/CT准确率分别为61.1%(11/18)和83.3%(15/18),两者差异具有统计学意义(P=0.043<0.05);术后24h神经功能评分及micro PET/CT准确率分别为78.6%(11/14),100%(14/14),两者无统计学差异(P>0.05)。结论:micro PET/CT早期2h筛选脑缺血再灌注模型,优于神经功能评分;在24h时,两者准确性无统计学差异。第二部分18F-FDG micro PET/CT观察三七总皂苷对缺血再灌注损伤后脑葡萄糖代谢影响的研究目的:采用micro PET/CT动态观察大鼠脑缺血再灌注损伤后脑葡萄糖代谢变化,与大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能评分、脑组织病理结果及免疫组化联合分析,评价三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤的疗效,并初步探讨三七总皂苷影响葡萄糖代谢的机制。方法:将40只健康雄性大鼠单纯随机分为五组(n=8):假手术组(A组),空白对照组(B组),三七总皂苷高剂量组(C组),三七总皂苷低剂量组(D组)及阳性对照组(E组)。采用改良的Zea-Longa线栓法制作脑缺血再灌注模型,经右侧颈外动脉插线阻塞右侧大脑中动脉,脑缺血空白对照组(B组)及治疗组(C、D、E组)插线深度约1.8cm,假手术组插线深度约1.0cm,1小时后拔出线栓进行再灌注。三七总皂苷低剂量组(C组),三七总皂苷高剂量组(D组)及阳性药物对照组(E组)在术后3h开始,连续治疗3天。C、D、E组大鼠分别接受57.5mg/kg三七总皂苷,115mg/kg三七总皂苷及4mg/kg依达拉奉腹腔注射治疗;假手术组(A组)及空白对照组(B组)经腹腔注射同等体积的生理盐水。于建模成功后2h、6h、24h、48h及72h五个时间点,进行神经功能评分及尾静脉注射18F-FDG,40min中后行micro PET/CT检查。视觉分析及半定量分析micro PET/CT图像。72h后长期灌注取脑,制作HE染色病理切片及免疫组化检测GLUT-1及GLUT-3。以重复测量方差分析方法进行实验数据分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.神经功能评分:(1)假手术组,组内各时间点无统计学差异(F=1.699,P=0.178>0.05);(2)B-E四组神经功能缺损表现,随着时间的推移,有不同程度的恢复,组内及组间差异均具有统计学意义(P<0.05);(3)神经功能恢复效果:阳性对照组=高剂量PNS组>低剂量PNS组>空白组。2.micro PET/CT能直观反应缺血灶及周围水肿脑组织糖代谢情况,脑缺血灶及周围脑组织葡萄糖代谢明显减低。3.micro PET/CT示:(1)假手术组,组内SUV差异无统计学意义(F=1.912,P=0.273>0.05)。(2)B、C、D及E组内各时间点SUV具有统计学差异(P<0.05),各组术后6h,SUV达最低水平(SUV=1.08±0.18,n=32),随着时间推后,各时间点SUV逐渐增高。(3)药物干预前(术后2h),B、C、D、E四者组间无统计学差异(P>0.05)。(4)药物干预对各组脑组织糖代谢影响的效果:阳性对照组=高剂量PNS组>低剂量PNS组>空白组。4、HE染色直观反映治疗组(C、D、E组)水肿程度较空白对照组(B组)明显减轻,高剂量治疗组较低剂量治疗组水肿程度轻。5、免疫组化切片直观反映治疗组(C、D、E组)GLUT-1及GLUT-3阳性表达数较空白对照组多,高剂量治疗组较低剂量治疗组阳性表达细胞数目增多。结论:1、micro PET/CT能直观反映脑缺血灶及周围水肿组织的大致范围及葡萄糖代谢变化。2、三七总皂苷能改善MCAO/R大鼠神经功能缺失症状,使GLUT-1及GLUT-3表达上调,缺血灶及周围脑组织葡萄糖代谢增高,减轻脑组织水肿,具有神经保护作用。
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