DNA甲基化最常见的是基因组DNA上CpG二核苷酸胞嘧啶的第五位碳原子的甲基化,它是基因转录调控的主要表观遗传机制,甲基化异常可能导致人类疾病,例如癌症的发生。先进的“第二代基因测序”技术能够在单碱基水平上,对基因组DNA甲基化进行分析,为我们了解基因组中CpG甲基化与癌症发生之间的关系提供了新的思路,因此,DNA甲基化已被越来越多地用作癌症诊断的生物标志物。用于常规的医学诊断中的DNA甲基化分析方法,要求能够简便、准确、灵敏的检测基因组中CpG甲基化,且不需要昂贵仪器设备。目前,基于PCR的分析方法被广泛地用来检测CpG甲基化,然而,这类方法在实际应用中存在着诸多挑战：第一,基于PCR的分析方法存在非特异性扩增,容易受假阳性信号干扰。其次,大多数以PCR为基础的方法需要耗时费力的实验操作和昂贵的实验仪器。许多新开发出来的方法不依赖于PCR扩增,然而这些方法灵敏度很低,无法满足基因组样品中CpG甲基化检测的要求。为了解决上述甲基化分析中存在的问题,在本论文中,利用甲基化敏感型限制性内切酶(HpaⅡ)特异性地区分甲基化和非甲基化DNA,我们建立了基于环介导等温扩增(LAMP)反应的DNA甲基化分析法。该方法首先用HpaⅡ处理目标DNA,在内切酶特异识别位点处,非甲基化目标DNA被切断,而甲基化DNA目标序列仍然保持完整。随后,利用LAMP反应快速扩增未被切割的甲基化DNA,能够获得高灵敏度的检测结果且几乎没有背景信号干扰。因此,与传统的甲基化分析方法相比,我们所提出的方法能够获得更高的灵敏度和选择性,可以检测浓度低至10 aM的甲基化DNA目标分子,在大量非甲基化DNA存在的样品中可检测到0.1%的甲基化DNA。另外,该方法在等温条件下进行,不需要任何DNA标记,用普通的荧光染料SG即可实现甲基化DNA的实时检测,因此,该方法还具有简单且成本低的优点。基于LAMP反应的甲基化法也可以很好地应用于基因组DNA中CpG甲基化分析,能检测到低至100 pg的甲基化基因组DNA。因此,该方法在疾病诊断研究和DNA甲基化的生物学功能研究领域具有很好的应用前景。