酶是具有高催化活性和底物特异性的生物催化剂,在环境、工业、医学和生物传感领域应用广泛。但是,酶的活性在使用时容易受到外界环境（如极端p H、温度和有机溶剂）的影响,因此,酶催化的全部潜力尚未被充分开发。找到克服这些缺点的有效策略是酶催化领域主要问题。目前,提高酶性能最突出和最成功的研发策略是酶固定化（EI）。酶固定化的手段有很多,比如共价键连接、交联、包埋等,对比几种方法,包埋法对酶结构的破坏概率较低,且有效提高酶活性。刺激响应性高分子受外部环境（温度、光、电、p H、盐浓度、磁场等）刺激,导致物理化学性质或者结构能够做出相应变化,在传感器、军事、建筑、电子器件、医疗等领域有着较高的应用价值。利用化学或物理的方式将刺激响应高分子材料与生物酶结合制备成酶催化反应器,从而对酶活性进行可逆调控,这些酶催化反应器同时具备独特的刺激响应性和高效的催化活性,为智能型催化材料的发展和应用提供了基础。聚（N-异丙基丙烯酰胺）（PNIPAAm）材料是其中应用最多的热响应性高分子材料,当外界温度在低临界相转变温度（LCST）时材料会出现明显的相转变。但是PNIPAAm仅仅具备热响应,刺激响应性单一,限制了其使用范围。因此,作为固定化酶载体材料使用时,多重响应性材料更具实用前景。因此,本文合成温度/pH响应性的P（NIPAAm-co-Ac Ty-co-AAc）共聚物,利用其作为辣根过氧化物酶（HRP）酶固定化载体材料,在HRP/H2O2的催化交联下制备两种温度/p H响应性的微凝胶固定化酶反应器,并分别研究其催化行为及其多重响应的酶活性调控,具体研究工作如下:（1）以N-异丙基丙烯酰胺（NIPAAm）、丙烯酸（AAc）、酪醇基丙烯酸单体（AcTy）自由基聚合合成温度/p H响应性的P（NIPAAm-co-Ac Ty-co-AAc）共聚物,用其与酪胺（Tyr）改性的海藻酸钠（SA-Tyr）在Ca2+离子交联和HRP/H2O2酶催化交联下形成双交联的微凝胶固定化酶反应器,通过扫描电镜分析,发现此微凝胶固定化酶反应器内部具有双交联网络结构,为酶的固定化扩大了附着点。以橙黄Ⅱ和邻苯三酚为催化底物,分析该微凝胶固定化酶反应器在极性溶剂水相中和非极性有机相（甲苯）中的催化参数,发现微凝胶固定化酶反应器为辣根过氧化物酶（HRP）提供了水环境,使其不仅在水相中具有高活性,还解决水溶性酶无法用到有机溶剂反应中的问题,并在有机相中具备高催化率。且无论在水相中还是在有机相中都能重复多次使用,并具有较佳的热稳定性。且由于微凝胶反应器中含有温敏性NIPAAm链段与p H响应性AAc链段,此反应器的酶活性可被温度、p H的调控。对自由酶与固定化酶动力学分析,表明微凝胶固定化酶反应器对底物亲和力较高。（2）通过P（NIPAAm-co-Ac Ty-co-AAc）在水中自组装形成胶束,利用HRP/H2O2酶催化交联酪醇基团制备了交联胶束,并同时固定HRP。以芘为荧光探针测定了不同结构的P（NIPAAm-co-Ac Ty-co-AAc）聚合物形成的胶束的临界胶束浓度（CMC）,结果表明亲水性单体（AAc）在聚合物中含量越多,越不易形成胶束,p H越低,越容易形成胶束。与未交联的胶束相比,通过HRP交联的胶束结构较稳定。以橙黄Ⅱ为催化底物模型,探索了固定化HRP用量、H2O2浓度、初始橙黄Ⅱ浓度和反应时间对交联胶束固定化酶的催化效果的影响,得到最佳催化条件:10mg固定化酶,0.4m M的H2O2,橙黄Ⅱ的初始浓度为0.05m M,反应时间为200min。同时探索温度、p H对胶束固定化酶的催化活性影响,表明胶束固定酶的活性较好。对自由HRP与胶束固定化酶进行动力学分析,结果表明酶交联胶束载体构建的微反应环境与酶分子具有良好的相容性,有利于辣根过氧化物酶的活性表达,因此胶束固定化酶具备较高的反应速率。