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核糖核酸定位是哺乳动物细胞中存在的一种普遍现象，通过这种方式可以将蛋白质精确定位到其功能位点。大量研究表明核糖核酸分子的定位过程，是在细胞内各种作用因子的作用下经过多种运输途径完成的，而且不同的核糖核酸分子所需的运输方式也不同。经过这一复杂而又高度协调的过程，细胞中的核糖核酸究竟定位到哪种亚细胞结构进行后续的翻译和降解过程，目前还不清楚。本研究以Hela S3细胞为实验材料，对细胞内RNA分子的分布进行整体水平的检测与分析;借助单分子活细胞成像系统，探究其定位的亚细胞结构与功能。 本研究主要内容包括：⑴建立核糖核酸分子的活细胞成像系统。为了直接观察细胞内部核糖核酸分子的动态变化及分布情况，我们将一段重复的 MS噬菌体茎环结构连接至目的基因的3’UTR区，建立了实时观察活细胞内核糖核酸分子的成像系统。⑵核糖核酸定位于中间纤维。通过将Hela S3细胞分级分离为细胞核、中间纤维骨架和细胞质等可溶性组分，定量分析其中核糖核酸的含量，发现细胞中核糖核酸倾向于分布到细胞骨架上;借助活细胞成像系统和超高分辨率显微镜发现细胞中有定位的和没有定位的核糖核酸均定位于中间纤维。⑶利用CRISPR/Cas9技术，敲除细胞质全部的中间纤维系统，得到中间纤维完全敲除的细胞系。⑷中间纤维有利于核糖核酸的翻译。通过比较中间纤维全部敲除的细胞与正常细胞中蛋白质合成速度的快慢，发现中间纤维敲除的细胞中核糖核酸的翻译速率下降。