副溶血弧菌是一种广泛存在于水环境中的革兰氏阴性嗜盐菌,更是一种常见的食源性病原菌,可污染多种水产品,并引起人的食物中毒。其鞭毛基因系统复杂,参与粘附作用,包括周身鞭毛和极性鞭毛两种形式。鞭毛基因系统包括约57个基因和3个开放阅读框,极性鞭毛系统与周身鞭毛系统的结构与装配成分并不分享。本实验试图制备出一株抗其极鞭毛蛋白FlaB的高亲和力的单链抗体,希望建立一种更快速检测VP的检测手段。本实验首先从VP基因组中PCR扩增出flaB基因,并构建出重组质粒pET32a(+)-flaB。将该质粒转化宿主菌E. coli BL21( DE3 ),利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白FlaB,经Ni2+-NTA纯化。以纯化的目的蛋白作抗原免疫BalB/C小鼠, ELISA间接法检测抗血清的效价,效价达到后提取总RNA,通过RT-PCR反转录成cDNA、然后以cDNA模板PCR获得抗体重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL,再用15氨基酸连接短肽Linker连接VH、VL组装成有活性的scFv基因,再将scFv基因构建到噬菌体载体pCANTAB-5E上,转化大肠杆菌TG1,实现与cpⅢ蛋白的融合表达,建立丝状噬菌体单链抗体展示库。高库容量的噬菌体抗体库建立后,通过3~5轮的富集淘选和ELISA检测,最终选出一株亲和力高、稳定性强的单链抗体噬菌体,再将此噬菌体侵染大肠杆菌HB2151,实现单链抗体的可溶性表达。