垫状卷柏是民间传统用药,现代药理学研究证明垫状卷柏具有抗肿瘤、降血糖、抗菌抗病毒等多种药理活性,15版《药典》收载卷柏或垫状卷柏为药用品种。双黄酮类化合物被认为是卷柏属植物的主要药效成分,其中穗花杉双黄酮为垫状卷柏提取物中含量较高的双黄酮,具有降血糖、抗氧化、抗炎等多种生物学活性作用。本课题将以穗花杉双黄酮含量为考察指标,对提取方法、富集工艺进行优化,并对富集后的垫状卷柏提取物进行定性分析及活性评价,同时构建卷柏药材指纹图谱,主要内容如下:(1)在单因素实验基础上以乙醇浓度、加醇倍量、提取时间、提取次数设计响应面,优化醇提工艺。得到最优提取条件:乙醇浓度71%、提取时间60 min、提取次数3次、加醇倍量12倍,在此条件下,穗花杉双黄酮提出量为17.28 mg/g。以穗花杉双黄酮含量为主要指标,采用大孔树脂和二次沉淀两种简单的方法富集垫状卷柏粗提物,并优化工艺参数。大孔树脂最优参数:提取物浓度100 mg/mL,上样流速1.0 mL/min,80%乙醇洗脱,洗脱流速1.0 mL/min,洗脱溶剂用量4倍柱体积,在此条件下提取物中穗花杉双黄酮含量由原来的13.79%提高至52.46%;二次沉淀最优参数:乙醇浓度30%,水沉温度5℃,搅拌速度400 rpm,加水速度3 mL/min,该条件下提取物中穗花杉双黄酮含量提高至47.92%。大孔树脂富集工艺更适用于垫状卷柏提取物中穗花杉双黄酮的富集。(2)利用HPLC-MS~n技术结合化合物碎片信息及文献资料,对富集后垫状卷柏提取物进行定性鉴别,共鉴定27个化合物,其中13个黄酮类成分、10个炔酚类成分以及4个其他类型的化合物,为有效地阐明垫状卷柏提取物的药效物质基础提供参考价值。(3)对富集后的垫状卷柏提取物进行体外降糖活性和抗氧化活性试验。结果表明垫状卷柏提取物对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制作用,其IC50值分别为0.1978 mg/mL(阿卡波糖的IC50值为2.6996mg/mL)。DPPH实验表明垫状卷柏提取物是一种慢速抗氧化剂,其IC50为184.8μg/mL(VC的IC50值为12.84μg/mL)。(4)对14批卷柏属药材进行含量测定并建立卷柏药材指纹图谱的共有模式,指定7个共有峰,其中卷柏药材相似度均大于0.8,聚类分析和主成分分析均将样品分为4类,其中2号峰(穗花杉双黄酮)是卷柏药材分类归属的关键成分,从产地分类归属看指纹图谱技术结合化学计量学可为卷柏药材的整体质量评价提供科学依据。本课题对垫状卷柏提取物做了较为系统的研究,为其在工业生产、药效物质基础、药品开发研究等方面提供一定的科学依据。